Utilize este identificador para referenciar este registo: http://hdl.handle.net/10400.6/3886
Título: Development of new therapeutic strategies for siRNA delivery
Autor: Pereira, Patrícia Alexandra Nunes
Orientador: Sousa, Fani
Figueiras, Ana
Palavras-chave: Ácido ribonuclico (RNA)
RNA - siRNA
Nanopartículas
Poliplexos
Data de Defesa: 2011
Resumo: A importância do RNA em numerosos processos biológicos tem aumentado substancialmente nos últimos anos. Os RNAs de baixo peso molecular (sRNAs) são cada vez mais reconhecidos como moléculas reguladoras que desempenham papéis cruciais em todos os organismos. Devido à sua especificidade e eficácia, os sRNAs podem ser considerados promissores como agentes terapêuticos, nomeadamente na terapia baseada em RNA de interferência. Estas estratégias geralmente são baseadas na utilização de siRNA sintético. Embora a síntese de siRNA possa ser muito eficiente, verifica-se normalmente a presença de oligonucleótidos contaminantes, o que desencadeia a necessidade do desenvolvimento de novos processos de produção de siRNA com elevado grau de pureza, adequado para uso em terapia. A bactéria Rhodovulum sulfidophilum tem a capacidade de secretar sRNA, existindo assim a possibilidade do uso deste microrganismo para a obtenção de sRNA recombinante, com elevada aplicabilidade terapêutica. No entanto, o sucesso das terapias baseadas em RNA depende também da capacidade de entrega do sRNA terapêutico, de forma selectiva e eficiente, aos órgãos-alvo, com a mínima toxicidade. Para este efeito, foram formuladas nanopartículas e outros veículos de entrega com elevada capacidade de transfecção e que possuem características ideais para a libertação do material genético. A fim de optimizar a produção de sRNAs extracelulares usando a bactéria Rhodovulum sulfidophilum DSM 1374 foi estudada a influência da temperatura e concentração de NaCl no crescimento e na produção de sRNA extracelulares. Os ensaios realizados demonstraram que o crescimento em aerobiose, na ausência de luz, a 30 ºC, em meio NB suplementado com 3 % de NaCl, conduziu a uma produção máxima 197 ± 0,55 Mg/mL de sRNAs extracelulares. Tendo em vista o aperfeiçoamento das terapias baseadas no RNAi foram desenvolvidos vectores não virais para a entrega de siRNA usando polímeros comerciais, tais como polietilimina, quitosano e poli(alilamina). Os resultados obtidos demonstraram que as propriedades estruturais (tamanho, potencial zeta e morfologia) das nanopartículas são fortemente dependentes do peso molecular, da densidade de carga e estrutura do policatião. Para além destas observações, verificou-se que o quociente entre os grupos amina do policatião e os grupos fosfato do RNA (N/P rácio) também afecta a formulação das nanopartículas. Por conseguinte, quaisquer alterações nestes parâmetros irão influenciar a eficiência de encapsulação, bem como a protecção e estabilidade do sRNA. A conjugação destas tecnologias inovadoras oferece um ponto de partida para o futuro desenvolvimento de aplicações baseadas em siRNA com relevância terapêutica.
URI: http://hdl.handle.net/10400.6/3886
Designação: Mestrado em Bioquímica
Aparece nas colecções:FC - DQ | Dissertações de Mestrado e Teses de Doutoramento

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