Santos, Cecília Reis Alves dosGonçalves, Isabel Maria Theriaga Mendes VarandaCosta, Ana Raquel Ferreira da2013-09-242013-09-242013-06http://hdl.handle.net/10400.6/1339A morte celular mediada pela disfunção mitocondrial pode estar associada com a acumulação de péptido β-amiloide (a-beta), que é um dos principais fatores causadores da doença de Alzheimer. O plexo coroide (CP) tem um papel fundamental na remoção do a-beta do líquido cefalorraquidiano (CSF), evitando a sua acumulação e consequente morte neuronal. No entanto, o a-beta pode também induzir a apoptose nas células epiteliais do plexo coroide, com a consequente redução da eficiência da barreira deste tecido. As hormonas sexuais regulam a acumulação de a-beta, reduzindo os seus níveis e, consequentemente, a apoptose. O CP é um alvo reconhecido das hormonas sexuais, e estas hormonas afetam a expressão de vários genes da via apoptótica e, portanto, podem afetar a apoptose induzida por a-beta nestas células. O objetivo deste trabalho foi analisar a expressão de genes apoptóticos no CP de rato e estudar o efeito das alterações nos níveis de hormonas esteroides na expressão destes genes, o que pode ter um papel importante na neuroproteção relativa ao péptido β-amiloide e, portanto, na doença de Alzheimer. Começámos por analisar a expressão de vários genes da cascata apoptótica (Casp2, Casp3, Cflar, Casp9, BCl2l1, Mdm4p53, GzmC e Cox4i1), por PCR, na linha celular de CP, Z310, e no plexo coroide de rato, confirmando-se a sua expressão neste epitélio. Além disso, as proteínas de apoptose caspase-3 e Cox4 também foram localizadas por imunohistoquímica e whole-mount (IHC de fluorescência) no citoplasma das células do CP de rato. A expressão de BCl2l1, Mdm4p53, Casp2, Cflar e Casp9 foi comparada por real-time PCR por meio do qual foi possível confirmar que estes genes são diferencialmente expressos entre animais machos e fêmeas Sham e OOX e OVX, respetivamente. A partir desta análise, podemos concluir que a apoptose no CP está sujeita a regulação pelas hormonas sexuais em ratos machos e fêmeas. Estão a decorrer estudos, em células de CP, para analisar o impacto dos níveis hormonais na apoptose induzida pelo a-beta.Cell death mediated by mitochondrial dysfunction may be associated with the accumulation of β-amyloid peptide (a-beta), which is one of the major causative factors of Alzheimer's disease. The choroid plexus (CP) has a key role on the clearance of a-beta from the cerebrospinal fluid (CSF), thereby preventing its accumulation and consequent neuronal death. However, a-beta may also induce apoptosis in the choroid plexus epithelial cells, thereby reducing the efficiency of this tissue barrier. Sex hormones regulate the accumulation of a-beta, reducing its levels and consequently apoptosis. CP is a recognized target for sex hormones, and these sex hormones affect the expression of several genes of the apoptotic pathway and thus may affect a-beta induced apoptosis in these cells. The aim of this work was to analyze the expression of apoptotic genes in rat CP and study the effect of changes in steroid hormones levels in the expression of these genes, which may have an important role in neuroprotection against β-amyloid peptide and hence Alzheimer's disease. We began by analyzing the expression of several genes of the apoptotic cascade (Casp2, Casp3, Cflar, Casp9, Bcl2l1, Mdm4p53, GzmC and Cox4i1), by PCR, in the CP cell line Z310 and in rat CP, confirming their expression in this epithelia. In addition, the apoptotic proteins Casp3 and Cox4 were also located by immunohistochemistry and whole-mount (Fluorescence IHC) in the cytoplasm of rat CP cells. The expression of Bcl2l1, Mdm4p53, Casp2, Cflar and Casp9 was compared by Real time PCR through which it was possible to confirm that these genes are differentially expressed between male and female sham and OOX or OVX rats. From this analysis we conclude that apoptosis in CP is subject to regulation by sex hormones in male and female rats. Studies are underway in CP cells, to analyze the impact of hormone levels in a-beta induced apoptosis.porRegulação da apoptose - Hormonas sexuaisPlexo coroide - EnvelhecimentoHormonas esteroidesDoença de Alzheimer - ApoptoseDoença de Alzheimer - Hormonas sexuaismaster thesis