Granadeiro, Luiza Augusta Tereza Gil BreitenfeldMartinho, AntónioMendes, João Fernando Pereira2013-02-012013-02-012009http://hdl.handle.net/10400.6/994Os fármacos imunossupressores, tais como, a Ciclosporina (CsA) e o Tacrolimus (FK506) desempenham um papel fundamental na manutenção da funcionalidade dos enxertos, evitando o desenvolvimento dos processos de rejeição. Diferentes alterações na biodisponibilidade dos fármacos podem estar associadas à variabilidade genética interindividual, que condicionam o metabolismo e o transporte dos mesmos. A biodisponibilidade da CsA e do FK506, parece estar associada à variabilidade do gene do citocromo P450 IIIA (CYP3A) que desempenha um papel fundamental no processo de eliminação dos referidos fármacos, e ao gene “multi drug resistance 1” (MDR1), que codifica a poliglicoproteína-P (P-gp), uma proteína que participa nos processos de transporte activo de vários substratos. Assim, é objecto deste trabalho estudar variações genéticas pontuais (SNPs) nos genes CYP3A e MDR1, relacionando-as com as concentrações plasmáticas de CsA e de FK506. Este estudo, centra a sua atenção numa inserção de uma guanina no exão 3 do gene CYP3A, que origina um codão “stop” prematuro resultando uma proteína truncada. No que diz respeito ao gene MDR1, foi dada atenção a uma substituição G2677T,A no exão 21, e a uma substituição C1236T no exão 12. Para este propósito foram analisados dois grupos de transplantados renais, um a receber uma terapêutica imunosupressora baseada em CsA e um outro grupo a recorrer a uma terapêutica com FK506. Como resultado do estudo efectuado, verificou-se uma frequência de 65% (n=20) para a inserção G no exão 3 do gene CYP3A5, no grupo de indivíduos a realizar uma terapêutica baseada em CsA. No gene MDR1 verificou-se uma frequência de 3,7% (n= 27) para o SNP 1236C>T e uma frequência de 9,1% (n=22) para o SNP 2677G>T. No grupo de indivíduos a realizar uma terapêutica com base em FK506, a inserção no gene CYP3A5 ocorreu com uma frequência de 78,26% (n=23), o SNP 1236C>T no gene MDR1 verificou-se uma ocorrência de 8,7% (n=23) e a substituição G2677>T,A ocorreu com uma frequência de 5,56% (n=18). Com este estudo, foi possível concluir que, de entre os indivíduos transplantados a realizar uma terapêutica com base em FK506, os portadores da mutação C1236T no gene MDR1, apresentam uma concentração plasmática deste fármaco em 44,4% superior aos indivíduos “wild type”. Já os indivíduos portadores da mutação G2677T,A apresentam concentrações plasmáticas de FK506 em 44,7% superiores aos indivíduos “wild type”. Este facto, vem evidenciar a importância em termos da farmacodinâmica que algumas mutações apresentam. Assim, dada a grande variabilidade genética entre indivíduos, o conhecimento prévio de SNPs em genes associados com o metabolismo revela-se de grande relevância para a compreensão e optimização da terapêutica imunosupressora a instituir ao doente.Immunosuppressive drugs such as tacrolimus (FK506) and cyclosporine (CsA) play an essential role in graft survival, preventing rejection. Large interindividual differences in drug metabolizing enzymes as well as in drug transporters make the task of reaching the optimal plasma concentration difficult. The bioavailability of CsA and FK506 seems to be associated with the Cytocrhome P450 IIIA (CYP3A) gene, which is responsible for the elimination process of such drugs. It has also been described that the Multi Drug Resistance 1 (MDR1) gene that encodes for poliglycoprotein-P (P-gp) may in some way influence the metabolizing action of immunosuppressive drugs such as FK506 and CsA. It is therefore the aim of this work, to study single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the CYP3A and MDR1 genes and correlate this information with the plasma concentration of FK506 and CsA. In this study we focus our attention to a G insertion in exon 3 of CYP3A5 gene that results in premature stop codon originating a truncated protein. In the MDR1 gene we analyzed a 2677G>T,A substitution in exon 21 and a 1236C>T substitution in exon 12. For this purpose two distinct groups of renal transplant recipients were analyzed by sequencing, one receiving a CyA immunosuppressive regime and other relying on a FK506 based immunosuppression. For the group of individuals receiving a CyA regime it was found a 65% frequency (n=20) for the G insertion in exon 3 of the CYP3A5 gene. In the MDR1 gene the SNP 1236C>T occurred with a 3,7% frequency rate (n=27) and for the SNP 2677G>T,A the frequency was 9,1% (n=22). For the group of individuals receiving an FK506 regime the CYP3A5 insertion occurred in a frequency of 78,26% (n=23), the SNP 1236C>T of the MDR1 gene had a frequency of 8,7% (n=23) and the G2677>T,A substitution had a frequency of 5,56% (n=18). With this study, it is possible to conclude that in the group subjected to a FK506 based immunosuppression, those with the C1236T mutation in the MDR1 gene, had a plasma concentration 44,4% higher compared with Wild Type individuals. In the same group but regarding the individuals caring the G2677T,A mutation the plasma concentrations of FK506 were 44,7% higher than the wild type individuals. This fact reveals the significance that some mutations may have on the farmacodynamics of some drugs. Given the great genetic diversity between individuals, the knowledge of SNPs associated with metabolism, seems to be of great interest for the process of understanding and optimizing the right immunosuppressive regime.porTransplantação de órgãos - Aspectos imunológicosImunossupressão - CiclosporinaImunossupressão - CorticosteróidesFarmacogenéticaFarmacocinéticamaster thesis