Costa, Diana Rita BarataSousa, Ângela Maria Almeida deSantos, Adriana Oliveira dosAfonso, Inês Sofia Patricio2025-11-212025-11-212025-03-06http://hdl.handle.net/10400.6/19346Gene therapy is a promising and innovative strategy for cancer treatment, particularly for glioblastoma, an aggressive and highly lethal form of brain cancer with limited therapeutic options and a poor prognosis. Combining gene therapy with chemotherapy has the potential to amplify therapeutic effects through their synergistic interaction, offering a more effective approach to overcoming tumor resistance and improving patient outcomes. This study focused on the development of a co-delivery system based on BSA-coated TMZ-WRAP5/p53 nanocomplexes targeting glioblastoma cells. Temozolomide, a standard chemotherapeutic agent for glioblastoma, was associated with a plasmid encoding the p53 tumor suppressor gene. BSA coating was used to increase the stability, biocompatibility and delivery efficiency of the complexes. An Experimental Design tool was used to optimize the formulation of this complex, including the N/P ratio, BSA concentration and addition time. The optimization process involved evaluating key properties such as particle size, surface charge and DNA complexation capacity. It was determined that the ideal formulation had an (N/P) ratio of 1.03 and a BSA concentration of 0.08%, resulting in complexes of approximately 182 nm, a zeta potential of +9.8 mV and a DNA complexation efficiency of 96.5%. These BSAcoated spherical complexes showed high stability and biocompatibility. In vitro biocompatibility and cytotoxicity studies using MTT showed a substantial reduction in the viability of glioblastoma cells, without toxicity to astrocytes. The results of PCR and qPCR assays showed a significant increase in p53 levels in glioblastoma cells treated with the BSA-coated complex. These data show that this delivery system has significant potential to overcome the challenges associated with conventional glioblastoma therapies.A terapia génica é uma estratégia promissora e inovadora para o tratamento do cancro, particularmente para o glioblastoma, uma forma agressiva e altamente letal de cancro do cérebro com opções terapêuticas limitadas e um mau prognóstico. A combinação da terapia génica com a quimioterapia tem o potencial de amplificar os efeitos terapêuticos através da sua interação sinérgica, oferecendo uma abordagem mais eficaz para ultrapassar a resistência tumoral e melhorar os resultados dos doentes. Este estudo centrou-se no desenvolvimento de um sistema de co-entrega baseado em nanocomplexos TMZ-WRAP5/p53 revestidos com albumina bovina direcionado a células de glioblastoma. A temozolomida, um agente quimioterapêutico padrão para o glioblastoma, foi associada a um plasmídeo que codifica o gene supressor de tumores p53. O revestimento com BSA foi utilizado para aumentar a estabilidade, a biocompatibilidade e a eficiência de entrega dos complexos. Foi utilizada uma ferramenta de Desenho Experimental de forma a otimizar a formulação deste complexo, incluindo a relação N/P, a concentração e o tempo de adição de BSA. O processo de otimização envolveu a avaliação das principais propriedades, como o tamanho das partículas, a carga superficial e a capacidade de complexação do ADN. Determinou-se que a formulação ideal tinha um rácio (N/P) de 1,03 e uma concentração de BSA de 0,08%, resultando em complexos de aproximadamente 182 nm, um potencial zeta de +9,8 mV e uma eficiência de complexação de ADN de 96,5%. Estes complexos esféricos revestidos com BSA apresentaram uma elevada estabilidade e biocompatibilidade. Os estudos in vitro de biocompatibilidade e citotoxicidade com recurso a MTT, mostraram uma redução substancial da viabilidade das células do glioblastoma, sem toxicidade para os astrócitos. Os resultados de ensaios de PCR e qPCR mostraram um aumento significativo dos níveis de p53 em células de glioblastoma tratadas com o complexo revestido com BSA. Estes dados mostram que este sistema de entrega tem um potencial significativo para ultrapassar os desafios associados às terapias convencionais do glioblastoma.engNanopartículas Revestidas com BSAPéptidos WRAPDesenho ExperimentalTerapia CombinadaTerapia do GlioblastomaBSA-coated NanoparticlesWRAP Peptidesmaster thesis204036780