Browsing by Author "Alves, Ana Rita Martins"
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- Contribuição de mutações genéticas no gene gyrA para a resistência a fluoroquinolonas por Arcobacter butzleriPublication . Alves, Ana Rita Martins; Ferreira, Susana Margarida Paraíso; Domingues, Fernanda da ConceiçãoArcobacter butzleri é considerado o quarto agente de Campylobacter-like organism isolado a partir de amostras diarreicas em humanos. As fluoroquinolonas são normalmente utilizadas na primeira linha de tratamento de infeções severas causadas por Arcobacter spp.. A elevada frequência de resistência a esta classe de antibióticos observada em A. butzleri poderá constituir uma grande preocupação para a saúde pública. Assim, este trabalho tem como objetivo avaliar os mecanismos de resistência às fluoroquinolonas em A. butzleri, tendo como foco a contribuição de mutações espontâneas, bem como na sua diversidade, e no papel das bombas de efluxo. Inicialmente procedeu-se à determinação da concentração mínima inibitória (CMI) de estirpes suscetíveis a três fluoroquinolonas (ciprofloxacina, levofloxacina e moxifloxacina). Através do ensaio de flutuação foi determinada uma taxa média de mutação espontânea de 2.34x10-9 ± 1.72x10-9 para todas as estirpes de A. butzleri estudadas. Posteriormente, os mutantes foram avaliados pela determinação da concentração mínima inibitória e pela análise das mutações presentes na região determinante de resistência às quinolonas (RDRQ) dos genes gyrA e gyrB através da amplificação e sequenciação destas regiões. Todos os mutantes avaliados apresentaram resistência às fluoroquinolonas, tendo sido identificadas três mutações pontuais, uma já descrita para esta resistência em A. butzleri, a mutação Thr85Ile (C254T), e duas novas mutações nunca descritas em A. Butzleri, Asp89Asn e Asp89Gli (G265A e A266G respetivamente) na RDRQ da gyrA, associada à resistência, mas sem correlação com o valor de CMI. A influência do gene gyrB na resistência às fluoroquinolonas em A. butzleri foi também estudada, porém não foi verificada. Quando não foi observada relação entre resistência e mutação pontual no gene gyrA, os resultados sugerem um contributo das bombas de efluxo na resistência às fluoroquinolonas por parte de membros de A. butzleri. A transformação de uma estirpe suscetível permitiu validar o papel da mutação C254T na RDRQ do gene gyrA. Verificou-se ainda que a presença desta mutação, espontânea ou por transformação, parece não afetar a robustez de A. butzleri. Assim, os resultados sugerem que as mutações encontradas nos codões 85 e 89 da RDRQ da gyrA bem como a ação das bombas de efluxo estão na base da resistência às fluoroquinolonas.