Browsing by Author "Fernandes, Nuno Miguel do Nascimento"
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- Aplicação de cromatografia de interacção hidrofóbica na separação dos alergénios do látex Hev b1 e Hev b3Publication . Fernandes, Nuno Miguel do Nascimento; Tomaz, Cândida Ascensão TeixeiraA alergia de proteínas de latex de borracha natural (NRL) é um problema que afecta especialmente pessoas que contactam frequentemente com as luvas de látex. De entre os grupos mais afectados, destacam-se os trabalhadores da área da saúde (TAS) e os doentes com espinha bífida (SBP). As luvas de látex possuem um grande número proteínas e péptidos, mas apenas alguns são alergénios que participam na alergia ao látex. Assim, proteínas com um alto grau de pureza são essenciais para desenvolver métodos de diagnóstico e estratégias de imunoterapia. Apesar das proteínas recombinantes poderem usadas nestas metodologias, nem todos os alergénios recombinantes foram ainda validados relativamente à sua aplicação clínica. Torna-se assim importante o estudo de novos métodos de purificação de alergénios a partir das suas fontes naturais. As características hidrofóbicas dos alergénios Hev b 1 e Hev b 3, alergénios “major” para os SBP, sugerem a possibilidade da sua purificação por cromatografia de interacção hidrofóbica (HIC). Assim, o objectivo principal deste trabalho aplicar a HIC na separação de estes alergénios a partir de diferentes amostras de NRL. Inicialmente, neste estudo foram obtidos extractos a partir de látex amoniado através de dois métodos diferentes. Os resultados da electroforese SDS-PAGE mostraram uma grande diversidade de proteínas, com diferentes pesos moleculares, entre os dois processos de extracção, nomeadamente na concentração de Hev b 3. Os extractos de latex não amoniado foram usados sem qualquer tratamento. A HIC foi realizada usando uma coluna de epoxi-Sepharose com diferentes concentrações de sulfato de amónio no eluente. As fracções recolhidas foram analisadas por SDS-PAGE (12,5%) e por ELISA. Embora os resultados mostrem um fraccionamento de diferentes proteínas do latex amoniado, não foi observada uma separação selectiva do Hev b 1 e Hev b 3. Uma possível explicação, pode ter a ver com a baixa concentração de Hev b 3 na amostra e a complexidade dos métodos de extracção. A HIC da amostra de latex não amoniado mostrou uma separação selectiva de uma proteína com aproximadamente 14 Kilodalton (KDa) que pode corresponder ao Hev b 1, no entanto a identificação inequívoca desta proteína não foi conseguida. Os resultados obtidos, apesar de preliminares, mostram a possibilidade de aplicação da HIC num passo único na purificação de alergénios do látex a partir de látex não amoniado.