Percorrer por autor "Alves, Liliana Preciosa Moreira"
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- Sal quaternário de 2-metilbenzotiazole como ligando cromatográfico para a purificação de proteínasPublication . Alves, Liliana Preciosa Moreira; Ramos, Susana Sofia; Almeida, Paulo Jorge da SilvaA cromatografia de afinidade é o método de purificação mais seletivo para proteínas e outras biomoléculas. O desenvolvimento de novos suportes cromatográficos tem sido um tema de grande importância e interesse por parte de investigadores de diferentes áreas, no intuito de encontrar um suporte ideal que reúna características tais como custos baixos, eficiência, reutilizabilidade e estabilidade física e química. O sal de 2-metilbenzotiazole utilizado neste trabalho é de síntese fácil, baixo custo e apresenta na sua estrutura um braço espaçador longo e um grupo carboxílico que transformam este ligando sintético potencialmente adequado para a imobilização numa matriz e para posteriores estudos cromatográficos. Foram estudados vários métodos de imobilização do ligando à matriz no sentido de avaliar qual o melhor método para a imobilização deste tipo de ligandos. Dentro destes, a esterificação de Steglich revelou ser o método mais eficaz na imobilização do sal de 2-metilbenzotiazole a uma matriz de Sepharose CL-6B. Foram sintetizados vários suportes com diferentes densidades de ligando. Os suportes assim obtidos foram quantitativa e qualitativamente caracterizados por microscopia eletrónica de varrimento, espetroscopia de raios-X por dispersão em energia e análise elementar. Adicionalmente, foram exploradas as interações de afinidade entre os suportes cromatográficos obtidos e várias proteínas modelo. Os melhores resultados foram obtidos utilizando o suporte com a menor densidade de ligando, ou seja, de 0,18 mmol de sal de 2-metilbenzotiazole/g de suporte cromatográfico, o qual permite separar a ribonuclease, a a-quimotripsina e a albumina de soro bovino a partir de uma mistura artificial de proteínas. A separação das três proteínas foi conseguida através da eluição por passos, com a diminuição gradual da concentração de sulfato de amónio no tampão de eluição. Estes estudos iniciais permitiram demonstrar o potencial da aplicabilidade de ligandos catiónicos, tais como os sais de 2-metilbenzotiazole, para separação e purificação de proteínas por meio de cromatografia de afinidade, revelando um comportamento cromatográfico distinto e com boa reprodutibilidade.