Browsing by Author "Carvalho, Joana Vieira"
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- Dried Saliva Spot: uma nova ferramenta na monitorização terapêutica de fármacosPublication . Carvalho, Joana Vieira; Rosado, Tiago Alexandre Pires; Alba, Maria Eugénia GallardoO relatório de estágio apresentado é constituído por três capítulos. O primeiro é dedicado ao estágio curricular em Farmácia Comunitária realizado na Farmácia Holon Covilhã sob a orientação do Dr. Pedro Diamantino. O segundo capítulo descreve o estágio curricular em Farmácia Hospitalar orientado pela Dr.ª Olímpia Fonseca e realizado no Hospital Pêro da Covilhã, que faz parte do Centro Hospitalar da Cova da Beira. Em ambos os relatórios são abordados as atividades desenvolvidas, os conhecimentos adquiridos, as funções desempenhadas por cada colaborador e os aspetos legais relevantes de cada área. O terceiro capítulo é referente à componente de investigação laboratorial, desenvolvida no Centro de Investigação em Ciências da Saúde da Universidade da Beira Interior (. O presente trabalho, intitulado como “Dried Saliva Spot: uma nova ferramenta na monitorização terapêutica de fármacos”, descreve o desenvolvimento e validação de um método analítico para a determinação de fenitoína, fenobarbital, carbamazepina e do seu metabolito ativo utilizando cromatografia líquida (HPLC) acoplada a um detetor diode array (DAD). Foi comprovada a existência de correlação entre o plasma e o fluido oral para estes compostos, tornando esta matriz um ótimo meio de monitorização não invasivo. Para a preparação da amostra, adaptaram-se dos dispositivos utilizados em dried blood spot para fluido oral, resultando em dried saliva spot (DSS). O procedimento de extração, previamente otimizado, consistiu em aplicar 50 µL de fluido oral em papel de filtro WhatmanTM 903 protein saver, e secar por 1 hora. A extração foi feita com 1 mL de metanol acidificado (pH=5,5) e 5 minutos de agitação. Posteriormente, a amostra foi centrifugada durante 15 minutos a 3500 rpm. O sobrenadante foi evaporado e reconstituído com 80 µL de fase móvel. Para a separação dos compostos utilizou-se uma coluna Zorbax Rapid Resolution HT de 4,6x150mm;1,8 µm e uma fase móvel constituída por 35% acetonitrilo e 65% de água:metanol:trietilamina (75,6%:24,2%:0,3%) A metodologia descrita foi validada segundo normas de validação internacionais sendo os parâmetros estudados a seletividade, linearidade, limites de quantificação e deteção, precisão, exatidão, recuperação, estabilidade e fator de diluição. O procedimento foi linear para o intervalo de concentrações de 0,1 (limite inferior de quantificação - LLOQ) até 10 µg/mL, com coeficientes de determinação (R2) superiores a 0,99 para todos os analitos. Precisões intra-e interdia foram tipicamente inferiores a 15% para todos os analitos a todas as concentrações estudadas, enquanto a exatidão se situou dentro do intervalo de ±15%. As recuperações variaram entre 40,8 % e 60,9%. O método validado mostrou ser aplicável à análise de amostras reais, sendo então uma ferramenta vantajosa no âmbito de análises de toxicologia clínica e monitorização terapêutica. Este é o primeiro método que utiliza DSS para determinação de fármacos anticonvulsivos, demonstrando ótimas perspetivas para o uso rotineiro em laboratório pela sua rápida e fácil aplicação, para além das vantagens inerentes ao uso de fluido oral enquanto amostra.