Browsing by Author "Preto, Ana Isabel Esteves"
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- NRF2 polimorfismo rs35652124, como identificar os três genótipos? Identificação e otimização do métodoPublication . Preto, Ana Isabel Esteves; Granadeiro, Luiza Augusta Tereza Gil Breitenfeld; Almeida, Micaela Carina PereiraO seguinte trabalho é constituído por três capítulos relativos, respetivamente, à experiência profissionalizante realizada nas áreas de Investigação, Farmácia Comunitária e Farmácia Hospitalar, para a obtenção do Grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas. No Capítulo 1, destinado à componente de Investigação, é abordado o papel antioxidante do Nuclear factor-erythroid 2 - related factor 2 (Nrf2) e a influência que os polimorfismos genéticos associados a este fator de transcrição poderão representar na carcinogénese. Atualmente, o ser humano encontra-se cada vez mais exposto ao Stress Oxidativo (SO) que, por sua vez, se pode correlacionar com a etiologia de várias doenças, nas quais se inclui o cancro. Porém, existem vários mecanismos de proteção contra o SO. Têm sido realizados vários estudos que refletem a importância do Nrf2 no SO, uma vez que intervém neste processo mediante a ativação da transcrição de genes que codificam enzimas antioxidantes de fase II e proteínas que participam no transporte de xenobióticos, prevenindo alterações na cromatina provocadas pelo SO, o que lhe confere um papel antioxidante. O Nrf2 encontra-se no citoplasma, acoplado à proteína Kelch-like ECH-associated protein 1 (Keap1), o seu regulador negativo. Mutações somáticas que influenciem a perda desta regulação negativa ou a presença de Single Nucleotide Polymorphism(s) (SNPs) na região promotora do gene Nrf2 podem estar associadas a alterações na expressão deste fator de transcrição. As diferenças observadas entre indivíduos relativamente à expressão de genes envolvidos na via oxidativa e no metabolismo carcinogénico poderão estar relacionadas com estes polimorfismos genéticos. O cancro da mama é uma das doenças na qual as vias envolvidas no SO representam um fator de risco para o seu desenvolvimento. Sendo o cancro da mama o mais frequente entre mulheres, com maior percentagem de morbilidade e mortalidade a nível mundial e o segundo tipo de cancro com maior mortalidade que afeta maioritariamente mulheres, os SNPs na região promotora do gene, anteriormente associados a outras patologias, consideram-se um potencial alvo de investigação no cancro da mama. Têm sido identificados vários SNPs no gene Nrf2, nomeadamente o SNP rs35652124 (A?G) na região promotora do mesmo. Contudo, o impacto deste polimorfismo no cancro da mama não se encontra atualmente suficientemente explorado. Assim, pretendeu-se verificar em doentes do Centro Hospitalar Cova da Beira (CHCB) a presença do polimorfismo rs35652124 na região promotora do Nrf2, tendo este estudo laboratorial como objetivo identificar e otimizar o método mais adequado para distinguir os três genótipos do polimorfismo rs35652124 do Nrf2. Como objetivos específicos, o presente estudo pretendeu determinar os genótipos pelo método de Polymerase Chain Reaction (PCR) with Confronting Two-Pair Primers (PCR-CTPP) e pelo método de PCR with Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP), analisando os resultados de modo a escolher qual o melhor método a utilizar. A população do estudo consistiu em amostras de sangue periférico de 45 doentes do Departamento de Saúde da Mulher e da Criança, do CHCB, Covilhã – Portugal, que realizaram biópsia para despiste histopatológico de cancro da mama. Procedeu-se à extração de Ácido Desoxirribonucleico (ADN) a partir das amostras recolhidas. O método de PCR-CTPP foi executado para identificação do genótipo das amostras. No entanto, o método não pareceu ser fidedigno e como tal, por PCR convencional amplificamos a região de interesse que foi posteriormente enviada para a empresa STABVIDA® que efetuou a sua sequenciação. Após a sequenciação foram identificados os três genótipos do polimorfismo rs35652124 do Nrf2, nomeadamente: 23 casos AA (Wild Type (WT)), 19 casos heterozigóticos (AG) e 3 casos homozigóticos (GG). Depois de efetuada a genotipagem do polimorfismo rs35652124 nas amostras selecionadas, procedeu-se à identificação do método de PCR mais adequado, nomeadamente PCR-CTPP e PCR-RFLP. Através da análise dos resultados demonstrámos que, de entre os métodos aplicados, o mais fidedigno para a genotipagem das amostras foi o método de PCR-RFLP. Estudos prévios demonstram que SNPs do Nrf2 estão relacionados com o risco de vir a desenvolver cancro da mama e com o prognóstico da doença. Uma vez confirmado como estando associado o polimorfismo rs35652124 ao desenvolvimento e prognóstico do cancro da mama, a genotipagem do mesmo poderá definir o Nrf2 como biomarcador do prognóstico tumoral. O Capítulo 2 refere-se ao estágio curricular efetuado de 22 de Janeiro a 6 de Abril de 2018 na Farmácia Bem Saúde, em Bragança, com a supervisão da Dr.ª Eugénia Baptista. A realização deste estágio funcionou como elo de ligação entre o conhecimento teórico previamente adquirido e a sua aplicação prática. Pretende-se portanto, neste capítulo, descrever as atividades executadas ao longo deste período, enumerando as competências adquiridas durante o mesmo. O Capítulo 3 descreve o estágio realizado no Hospital Distrital de Bragança durante o período de 9 Abril a 1 de Junho de 2018 sob a supervisão da Dr.ª Ângela Aragão. O estágio teve como objetivo consolidar conhecimentos relativos à vertente Hospitalar da área das Ciências Farmacêuticas. Com este capítulo pretende-se relatar as atividades realizadas ao longo deste estágio que possibilitaram a integração de conhecimentos teóricos com a realidade profissional em contexto hospitalar.