Browsing by Author "Roque, Ana Catarina Santos"
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- RalGPS2 na proliferação e sobrevivência de células tumorais humanas de cancro da próstataPublication . Roque, Ana Catarina Santos; Santos, Adriana Oliveira dos; Vaz, Cátia Alexandra Vicente; Rocha, Sandra Catarina MoreiraA ativação das GTPases Ral (RalA e RalB), pertencentes a uma subfamília de proteínas Ras, é efetuada por 6 fatores de troca de nucleótidos de guanina específicos de Ral (RalGEFs). RalGPS2 (Ral GEF with PH domain and SH3 binding motif 2) é um dos membros da família de RalGEFs cuja ativação é independente da sinalização por Ras. Resultados anteriores obtidos em linhas de cancro do pulmão e um ensaio de duplohíbrido em leveduras (Santos A.O. e Camonis J., não publicado) sugeriram a hipótese de que RalGPS2 teria um papel na regulação dos co-ativadores transcricionais da via Hippo YAP/TAZ. No presente trabalho, essa hipótese foi testada silenciando RalGPS2 em células de cancro da próstata e avaliando o crescimento, a sobrevivência e a expressão de genes induzidos pela ativação de YAP/TAZ. O silenciamento de RalGPS2 por siRNA foi otimizado em células de cancro da próstata PC-3, sendo o efeito na viabilidade/proliferação celular avaliado pelo ensaio de redução de resazurina aos 5 dias após a transfeção. A percentagem de indução espontânea de apoptose e a distribuição do ciclo celular foram obtidos por citometria de fluxo após marcação das células com iodeto de propídio. A expressão de mRNA dos genes regulados por YAP/TAZ, CTGF e CYR61, assim como de RalGPS2, foi obtida por PCR quantitativo em tempo real. Adicionalmente, foi explorado o efeito do silenciamento de RalGPS2 na expressão de CTGF e CYR61 em condições de estimulação com soro fetal bovino. O silenciamento de RalGPS2 inibiu o crescimento de PC-3 (˜ 59%) e aumentou a taxa de apoptose espontânea das células. A expressão de mRNA de RalGPS2 diminuiu significativamente tanto aos 3 quanto aos 5 dias após o silenciamento, no entanto, não se detetou a diminuição da expressão dos genes CTGF e CYR61. Em conclusão, o papel de RalGPS2 no controlo da proliferação e sobrevivência de células PC-3 não parece estar associado à ativação de YAP/TAZ induzida pelo soro nesta linha celular.