Browsing by Author "Saraiva, Joana Sofia Ribeiro"
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- Otimização e implementação de um método de preparação de fibrilas de alfa-sinucleína para posterior desenvolvimento de um modelo animal da doença de ParkinsonPublication . Saraiva, Joana Sofia Ribeiro; Cristovão, Ana Clara Braz; Fiadeiro, Mariana Bernardo; Brito, Vanessa Sofia Figueiredo deA Doença de Parkinson é a segunda doença neurodegenerativa mais comum no mundo e é caracterizada pela perda seletiva dos neurónios dopaminérgicos na substantia nigra. A sua principal característica patológica é a formação de inclusões neuronais como os corpos de Lewy, constituídas por espécies proteicas misfolded agregadas. A alfasinucleína é uma proteína pequena envolvida no tráfico vesicular no cérebro, que compreende o modelo de polimerização-conversão-nucleação durante o seu processo de agregação. A agregação anormal promove a conversão de monómeros em fibrilas preformadas, que se acumulam nos neurónios. Deste modo, foram criados modelos animais que apresentam a forma patológica da alfa-sinucleína, cujo intuito é mimetizar a patologia, para melhor a compreender, e desenvolver novos tratamentos. A produção de fibrilas tem como objetivo a criação de fibrilas a partir de monómeros in vitro e após vários testes de controlo de qualidade das fibrilas preformadas, poder usá-las em modelos celulares ou modelos animais. Neste trabalho foi proposta a otimização de um método de preparação e formação das fibrilas preformadas com base em monómeros da alfa-sinucleína para posterior desenvolvimento de um modelo celular e animal da doença. Para avaliar a qualidade das fibrilas preformadas realizou-se o ensaio da Tioflavina T e estudou-se a estrutura secundária da proteína com base na técnica de dicroísmo circular. Os resultados deste estudo mostraram que para haver agregação proteica é necessário que a proteína se encontre na conformação correta, desordenada, desde a sua comercialização. Neste caso não foi possível obter fibrilas preformadas devido à qualidade dos monómeros comercializados, uma vez que a conformação apresentada era de a-hélice. De forma a garantir que o processo de fibrilização seja executado com sucesso é necessário refazer todo o processo de formação e avaliação de novos monómeros e fibrilas preformadas. Por outro lado, para otimizar e proporcionar a indução patológica com recurso às fibrilas preformadas da alfa-sinucleína num modelo animal é necessário fazer mais estudos que avaliem a sua caraterização e formação.