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- Optimização do processo de purificação dos canais de cálcio tipo L, isolados a partir de células do músculo lisoPublication . Santos, Michael David Lameiras; Correia, Ilídio Joaquim SobreiraO ião cálcio é um ião fundamental em todos os sistemas biológicos. Devido à sua capacidade para se ligar a diferentes ligandos, este ião tem um papel fundamental em muitas funções biológicas, tais como: regulação da pressão sanguínea, actividade cardíaca, proliferação celular, adesão celular, expressão génica, libertação de hormonas e de neurotransmissores. Os canais de cálcio dependentes de voltagem envolvidos no transporte deste ião para o interior da célula tornaram-se alvo de fármacos para a terapia de várias doenças, entre elas, cardiovasculares e gastrointestinais. Os canais de cálcio dependentes de voltagem tipo L são complexos polipeptídicos oligoméricos (~ 430 kDa), compostos por 4 ou 5 subunidades polipeptídicas com diferentes pesos moleculares: a subunidade α1 (190 – 250 kDa) é responsável pela formação do poro e confere as propriedades funcionais aos canais de cálcio tipo L; as subunidades auxiliares α2 (143 kDa), β (54 kDa), γ (30 kDa), δ (25 kDa), que modulam propriedades dos complexos do canal. O objectivo do presente estudo foi purificar os canais de cálcio tipo L existentes nas membranas das células do músculo liso isoladas de artérias umbilicais humanas. Para isso, foram removidos a geleia de Wharton e o sangue que rodeava as artérias. Posteriormente, isolaram-se as camadas de músculo liso a partir das artérias umbilicais. O passo seguinte constitui numa lise celular por métodos mecânicos/térmicos e em algumas centrifugações para obter as membranas celulares. Os canais de cálcio foram solubilizadas com N-Dodecil β–D–maltoside e posteriormente realizou-se uma ultracentrifugação a 210000g durante 2h00 para obter as proteínas membranares. A purificação dos canais de cálcio tipo L foi efectuada por cromatografia de interacção hidrofóbica usando a matriz epoxy sepharose. Inicialmente realizaram-se estudos em mini colunas com misturas de sais de diferentes concentrações. As diferentes fracções obtidas pela cromatografia de interacção hidrofóbica foram analisadas por electroforese SDS-PAGE e Western-Blot.