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- Obtenção de vacina de DNA plasmídico HPV-16 E6/E7 e avaliação da sua imunogenicidade in vitro e in vivoPublication . Almeida, Ana Margarida Cardoso Valério de; Sousa, Ângela Maria Almeida de; Sousa, Fani Pereira deA constante evolução da ciência tem permitido uma melhor partilha de conhecimentos na área da tecnologia do DNA recombinante, fornecendo um melhor conhecimento da informação contida nos genes e o impacto que alterações nesses genes poderão ter no organismo. A descodificação do genoma humano aliada ao progresso obtido no desenvolvimento de variados vetores de transporte de informação genética permitiu a evolução de terapias baseadas na entrega de genes terapêuticos, como a terapia génica e as vacinas de DNA. O desenvolvimento destas terapias trouxe uma nova esperança para o tratamento de certas patologias que, até então, permaneciam como intratáveis. Vetores biológicos e não biológicos têm evoluído largamente nos últimos anos, no entanto, a toxicidade demonstrada pela maioria dos vetores biológicos tem levado a um aumento de utilização de vetores não biológicos. O DNA plasmídico destaca-se entre os diversos vetores genéticos devido à simplicidade da sua produção, obtenção, baixo custo e ausência de toxicidade. As vantagens deste vetor têm levado a que a sua utilização como vacina de DNA tenha aumentado nos últimos anos, tornando-o o vetor de escolha na maioria dos estudos de investigação. As vacinas de DNA têm como modo de atuação a expressão de proteínas antigénicas com o objetivo de induzir uma resposta imunitária direcionada para essas mesmas proteínas, permitindo a prevenção e/ou tratamento de infeções virais e bacterianas. Torna-se imperativo o desenvolvimento de tecnologias que permitam a produção e purificação destes vetores, obtendo a maior percentagem de recuperação e pureza possíveis do plasmídeo na sua forma biologicamente ativa, a isoforma superenrolada (sc). A área da cromatografia tem progredido bastante no desenvolvimento de estratégias eficazes de purificação de plasmídeo, permitindo o aumento de produtividade e obtenção deste vetor e diminuindo eventuais custos associados à sua produção. O Vírus do Papiloma Humano (HPV) é um vírus sexualmente transmissível que se encontra atualmente associado ao desenvolvimento de massas tumorais devido à produção de duas proteínas oncogénicas, oncoproteínas E6 e E7, capazes de alterar o ciclo de proliferação celular e de provocar o crescimento anormal de células do organismo infetado. A tecnologia de vacinas de DNA apresenta-se assim como uma terapia promissora para infeções provocadas pelo HPV, através da indução de uma resposta imunitária contra as proteínas referidas. Recentemente, o nosso grupo de investigação conseguiu desenvolver de forma eficaz a produção e purificação da vacina de DNA sc HPV-16 E6/E7 através da utilização de um monolito modificado com ligandos de arginina, tirando partido dos princípios básicos da cromatografia de afinidade. Contudo, a recuperação do plasmídeo não foi a esperada, tendo sido apenas recuperado 39% da molécula alvo. O Desenho experimental é uma ferramenta estatística que, através da escolha correta dos fatores a serem avaliados, bem como os seus intervalos em estudo, permite a otimização de respostas de um sistema experimental. Deste modo, através do design experimental foi feita uma otimização ao sistema de purificação da vacina de DNA sc HPV-16 E6/E7 de modo a garantir um aumento de recuperação da molécula, mantendo o elevado nível de pureza. Com esse intuito, após uma avaliação inicial dos fatores e dos intervalos a serem usados, o design ‘Central Composite Face’ (CCF) foi utilizado para delinear um conjunto de experiências cromatográficas de modo a encontrar o ponto ótimo para a percentagem de recuperação do plasmídeo ser maximizada. A otimização foi bem-sucedida, permitindo a obtenção de uma percentagem de recuperação de cerca de 83%, mantendo-se a percentagem de 100% para a pureza. Após a otimização da estratégia de purificação, estudos de transfeção in vitro foram realizados de modo a avaliar a capacidade de transfeção celular e consequente expressão da proteína codificada pelo gene-alvo contido na vacina de DNA. Células CHO-1, isoladas a partir de tecido ovárico de rato chinês, foram cultivadas e transfetadas com a isoforma sc purificada através da estratégia otimizada com o monolito de arginina, bem como com a isoforma circular aberta (oc) e DNA plasmídico obtido através de um kit comercial, de modo a avaliar qual a melhor estratégia para transfeção. Através das técnicas de western blot e imunocitoquímica foi possível verificar que a entrada do pDNA nas células eucarióticas ocorreu com sucesso (processo de transfeção), observando-se um aumento significativo de expressão génica das proteínas E6 e E7 em comparação ao grupo de controlo (células não transfetadas). A avaliação da expressão génica da proteína E6 dos diferentes tipos de plasmídeos utilizados permitiu verificar que o aumento de expressão desta proteína foi mais significativo com a amostra de plasmídeo sc purificado pelo monolito de arginina, concluindo-se que de facto a isoforma sc induz uma maior eficiência de transfeção.
- Caracterização da utilização de medicamentos em idosos residentes em lares através da aplicação dos critérios de BeersPublication . Santos, Sara Catarina Gomes Coelho dos; Alves, Gilberto LourençoEste documento encontra-se dividido em três capítulos, correspondendo cada capítulo às diferentes experiências a nível profissional, nomeadamente ao nível da investigação, farmácia hospitalar e farmácia comunitária. O primeiro capítulo, correspondente à vertente de investigação, é direcionado para a avaliação da utilização de medicamentos em idosos. O objetivo deste estudo foi detetar medicamentos potencialmente inapropriados em idosos residentes em lares nas regiões de Marinha Grande e Leiria, através da aplicação dos critérios de Beers atualizados em 2012. A amostra em estudo corresponde a 315 idosos, dos quais 49% tomavam pelo menos um medicamento potencialmente inapropriado e 54% tinham prescrito, no mínimo, um medicamento a utilizar com precaução. Este estudo revelou uma frequência elevada de prescrição de medicamentos potencialmente inapropriados na amostra considerada, realçando a importância dos profissionais de saúde, como farmacêuticos, para alertarem para este problema, de modo a contribuir para melhorar a farmacoterapia nos idosos. O segundo capítulo deste documento descreve as atividades desenvolvidas e as competências técnicas e científicas adquiridas ao longo do estágio de farmácia hospitalar, no Hospital Sousa Martins na Guarda, no período de 3 de fevereiro a 28 de março de 2014. Ao longo deste capítulo é descrito o que observei e realizei durante o estágio, particularmente, no que respeita à gestão e distribuição de medicamentos, produtos e dispositivos médicos, à preparação de manipulados e à participação do farmacêutico nas visitas médicas. No último capítulo são referenciadas as competências técnicas e científicas adquiridas e as atividades desenvolvidas ao longo do estágio de farmácia comunitária, realizado na Farmácia Taveira, no concelho de Alcobaça, durante o período de 30 de março a 21 de junho de 2014. Este capítulo descreve o que observei e efetuei durante o período de estágio, ao nível do funcionamento e organização interna da farmácia, bem como no que respeita ao atendimento ao público, aconselhamento farmacêutico e prestação de cuidados de saúde ao utente.
- Aprender a Pensar CriticamentePublication . Neves, Paulo Jorge da Fonseca; Domingues, José António DuarteO presente trabalho é regulado pelo tempo em que vivemos, marcado por mudanças aceleradas, pela intensificação da interdependência entre pessoas e países e pelo aumento de perigos iminente. O tempo presente exige de todos nós um saber e um pensar exercitados no âmbito de uma reflexão ampla e disponível sobre as condições de nos podermos afirmar como pessoas livres e com autonomia e preparados para vivermos juntos, local ou globalmente. Para esta atitude de discernimento e de reflexão, consideramos que a aprendizagem do pensar crítico é fundamental, como consideramos que o ensino da filosofia no ensino secundário, pela sua natureza iniciática, é o âmbito por excelência para preparar e exercitar o aluno nesta atividade. A crítica, que foi o projeto regulador da ação política durante o século XVIII, pode reverter em dinâmica da ação pedagógica e didática no sentido em que o essencial desta ação consista em ensinar a emitir um juízo que distinga o autêntico e o inautêntico, o verdadeiro e o falso, o correto e o incorreto, o belo e o feio. Reconhece-se, pois, a importância de aprofundarmos a conceção da arte da crítica na tradição kantiana, no projeto da teoria crítica e da pedagogia crítica. Por outro lado, pretende-se mostrar, aqui, que a problemática crítica se torna especialmente inspiradora de programas de aprendizagem do seu princípio, como são os programas de metodologia de análise de texto, debate e pesquisa, que encontramos em Richard Paul, Linda Elder e Gerald Nosich. Pretende-se demonstrar que a arte da crítica reverte favoravelmente em aprendizagem do pensamento num programa didático crítico. O nosso intuito fundamental é enquadrar o programa de filosofia do ensino secundário português de acordo com a pertinência de um aprender a pensar criticamente. Tal é o desafio deste trabalho, que só será efetivo se for assumido e percorrido pelos envolvidos nesse processo, enquanto aprendizagem, o qual implica, desde logo, uma atenção aos elementos, critérios e características subjacentes à atitude de pensar criticamente.
- Trigonometria passado, presente e futuroPublication . Martins, Maria Cristina Fernandes; Bento, Sandra Margarida Pinho da CruzEste trabalho encontra-se dividido em duas partes: pesquisa científica e prática de ensino supervisionada. No trabalho científico fez-se uma investigação sobre os povos que contribuíram para a descoberta e evolução da trigonometria. Recorda-se a terminologia, o conceito de círculo trigonométrico e a transição das razões trigonométricas para as funções trigonométricas. Com o desenvolvimento da trigonometria surgiram identidades trigonométricas fundamentais neste ramo da matemática, e que hoje são imprescindíveis em várias outras áreas. Identidades que serão enunciadas e demonstradas neste trabalho, nomeadamente, o teorema de Ptolomeu, fórmula fundamental da trigonometria, fórmulas do seno e cosseno da soma e da diferença, lei dos senos e dos cossenos. É feita uma contextualização do ensino da trigonometria no ensino básico e secundário e são ainda apresentados dois exemplos da aplicabilidade da trigonometria que foram objeto de pesquisa nas disciplinas de Seminário de Investigação Matemática. A encerrar esta parte é feita uma análise de uma nova abordagem sobre a trigonometria, chamada de Trigonometria Racional. Relativamente à prática de ensino supervisionada é feita uma descrição sumária do que foi realizado no estágio pedagógico. É apresentado um conjunto de 6 planificações que correspondem a aulas lecionadas, no 9º e 12º ano de escolaridade.
- Preparação de um creme anticelulítico à base de extrato de RomãPublication . Lino, Filipa Santos Pinto de Almeida; Duarte, Ana Paula Coelho; Oliveira, Rita Manuela Palmeira deEste trabalho encontra-se dividido em duas grandes vertentes farmacêuticas, Farmácia Comunitária e Investigação. O capítulo 1 é referente à vertente Investigação, na qual se criou e desenvolveu uma emulsão anticelulítica. A celulite é uma perturbação que afeta milhões de mulheres globalmente e é caracterizada por uma aparência acolchoada da pele, comummente designada tipo «casca de laranja» e que ocorre principalmente na região pélvica, coxas posteriores laterais e abdómen. Classifica-se em vários graus, sendo que os mais severos levam situações dolorosas. Os tratamentos tópicos existentes não possuem grande evidência científica e os resultados são baseados maioritariamente na auto-avaliação das voluntárias. Num mercado que totabilizou 2,23% do volume de vendas global português (aproximadamente 865 milhões de euros), e a nível europeu apresentou um volume de negócios anual de 60 biliões de euros, é do maior interesse a obtenção de uma emulsão anticelulítica com rigor científico e eficácia comprovada, quer seja de caráter cosmético, farmacêutico ou cosmecêutico. Com este trabalho pretendeu-se criar e desenvolver uma emulsão anticelulítica do tipo água-em-óleo que pudesse ser certificado pela Ecocert na área dos cosméticos naturais e ecológicos/biológicos, para tal foram usados ingredientes naturais e uma percentagem de químicos dentro do valor tabelado. Como inovação foi usado sumo e óleo extraídos da romã como ingredientes ativos anticelulíticos, utilizou-se também infusão de chá verde com 2,33% de teor em cafeína. As emulsões foram formuladas variando o seu teor em cera e foram caracterizados em termos de estabilidade acelerada, assim como ensaios de textura, através da determinação do índice de peróxidos e através das características organoléticas. Os resultados obtidos indicam que a emulsão F3 que contém menor teor em cera (4% m/m) tem maior estabilidade. O segundo capítulo é relativo à vertente Farmácia Comunitária. O estágio curricular decorreu entre dia 3 de fevereiro e 21 de junho na farmácia Parente e sob tutoria da Doutora técnica Júlia Patrício. Durante este estágio foram demonstradas e avaliadas várias áreas nas quais um farmacêutico pode atuar, nomeadamente no atendimento e aconselhamento dos utentes, assim como na área de administração e gestão farmacêutica. Foi demonstrada toda a dinâmica existente entre funcionários, utentes, fornecedores e delegados de informação médica. Durante este estágio foi também promovido o uso racional dos medicamentos, parte muito importante na gestão de uma farmácia.
- Caracterização do perfil de consumo de ansiolíticos, sedativos e hipnóticos na Beira InteriorPublication . Agostinho, André Filipe Chambel; Alves, Gilberto LourençoNo contexto da experiência profissionalizante do Mestrado Integrado em Ciências Farmacêuticas da Universidade da Beira Interior, o presente trabalho encontra-se dividido em três capítulos: capítulo I – caracterização do perfil de consumo de ansiolíticos, sedativos e hipnóticos na Beira Interior; capítulo II – relatório de estágio em farmácia hospitalar e capítulo III – relatório de estágio em farmácia comunitária. A componente de investigação baseou-se na aplicação de um inquérito com o objetivo de avaliar o padrão de utilização de medicamentos ansiolíticos, sedativos e hipnóticos na Beira Interior, em função de variáveis sociodemográficas e farmacológicas. Dos 357 utentes em estudo, 243 eram mulheres (68 %) com destaque para a faixa etária dos 50-59 anos, como a mais inquirida. A maioria dos utentes em estudo eram casados, estavam empregados, pertenciam a um agregado familiar constituído por duas ou mais pessoas, possuíam o grau de licenciatura ou superior e consideravam ter uma saúde “razoável”. Os hábitos tabágicos e o consumo de bebidas alcoólicas revelaram-se superiores nos homens. Relativamente à caracterização farmacológica, o alprazolam é o fármaco mais consumido em ambos os sexos e em quase todas as faixas etárias. Os distúrbios do sono e as perturbações de ansiedade são as duas principais indicações terapêuticas que levam à utilização desta classe farmacológica com 38,1 % e 29,4 % respetivamente. É de realçar que as mulheres sofrem mais de ansiedade e os homens de distúrbios do sono. A grande maioria dos utentes (70,9 %) não respeita a duração de tratamento preconizada. Toda esta situação implica a necessidade de uma profunda reflexão acerca da prescrição e dispensa destes fármacos para melhorar a sua utilização. O segundo capítulo do relatório pretende destacar quais as competências técnico-científicas adquiridas e todas as atividades por mim desenvolvidas ou observadas no decorrer do estágio em farmácia hospitalar. Este estágio foi realizado nos Serviços Farmacêuticos do Centro Hospitalar Cova da Beira, no período decorrido entre 3 de fevereiro e 28 de março de 2014. Por fim, o último capítulo visa elucidar todo o funcionamento de uma farmácia comunitária e qual o papel do farmacêutico nesse contexto. Este estágio decorreu na Farmácia São Cosme, no período entre 31 de março e 20 de junho de 2014.
- Análise da qualidade dos resumos das características do medicamento de citotóxicos injetáveisPublication . Bastos, Diana Rita Gomes da Silva; Morgado, Manuel Augusto Nunes Vicente Passos; Pinto, Andreia Patrícia CostaA presente dissertação é composta por três capítulos. O primeiro capítulo diz respeito à investigação desenvolvida no âmbito da análise da qualidade de resumos das características do medicamento (RCM) de citotóxicos injetáveis com autorização em Portugal. Esta análise teve como príncipio verificar se vários pontos estavam em conformidade com as diretrizes europeias. A análise envolveu os seguintes itens: modo de administração, estabilidade após reconstituição e/ou diluição, condições particulares de conservação, falha no nome comercial, compatibilidade e características físico-químicas. Além disso, foram identificados os medicamentos cuja informação relativa à comercialização, no InfoMed, não está de acordo com a informação fornecida após contacto direto com os titulares de AIM dos mesmos medicamentos. A ideia de realizar este estudo surgiu da forte necessidade de estar ao alcance dos profissionais de saúde, envolvidos na preparação e administração de citotóxicos injetáveis, informação completa e explícita, para que a segurança do doente e a boa gestão dos recursos sejam asseguradas. A preparação e administração de citotóxicos por via parentérica merecem particular destaque por motivos de segurança e económicos, devendo ser executadas por pessoal devidamente habilitado respeitando as normas instituídas. Os resultados revelam que dos 238 RCMs analisados, 24,8% nas condições particulares de conservação 21,9% apresenta informação incompleta nas características físico-químicas, 8,4% na estabilidade após reconstituição e/ou diluição, 3,36% apresenta o nome comercial incorreto e ainda 1,7% apresenta a secção “Incompatibilidades” com informação incompleta. Ainda, após contacto com os titulares de AIM dos 126 medicamentos, com indicação de não comercialização no InfoMed, foi possível revelar que 21 estão a ser comercializados em Portugal. O segundo capítulo, relatório de estágio em farmácia comunitária, representa o estágio desenvolvido na Farmácia Prestígio, em Amarante. O terceiro capítulo diz respeito ao estágio desenvolvido em farmácia hospitalar, no Hospital Amato Lusitano da Unidade Local de Saúde de Castelo Branco.
- Conhecimento: da ignorância ao saberPublication . Dias, Carlos Alberto Ramos; Domingues, José António DuarteA razão da existência deste estudo relaciona-se com o facto de a investigação na área científica do ensino da Filosofia no Secundário constituir um desafio sempre novo e com preocupações acrescidas num período temporal algo conturbado em termos socioeconómicos. Vivemos um período histórico que necessita urgentemente de agentes interventivos e capazes de identificar soluções para os inúmeros e escandalosos erros de gestão democrática. Todos os tempos históricos exigem dos seus intervenientes respostas eficazes e sábias na verdade. A busca pelo conhecimento exige uma postura de simplicidade e humildade para que a verdade se torne real. O simples e o humilde estarão em condições de encontrar a verdade. A procura pelo conhecimento torna-se possível naqueles que o desejam com amor e abertura à discussão, em nome da ansiedade pela verdade. A Apologia de Sócrates é um desafio ao mundo do conhecimento. Sem o reconhecimento humilde de que não se sabe, não serão possíveis novos dinamismos de conhecimento. Popper, filósofo das ciências, insiste na densidade da ignorância socrática como forma de acesso ao conhecimento. Para Popper, o indivíduo precisa de encontrar em si o conhecimento, disponibilizando-se para refutar as suas teorias, como forma de eliminar os possíveis erros nelas existentes. Sócrates recorria ao diálogo para tornar o saber mais forte pelo reconhecimento da ignorância. A dialética elêntica é nevrálgica no desenvolvimento da refutação do pretenso saber em saber esclarecido e objetivo. Também para Popper é necessário aprender a eliminar os erros existentes nas teorias. Todos os homens apresentam teorias para os problemas, mas há que saber refutá-las de forma a encontrar as melhores soluções. A relação dialética contribuiu decisivamente para a alteração de fracas razões em fortes razões, como Sócrates procurava fazer, tal como Popper. A parte prática da nossa reflexão versou-se em duas aulas de discussão aberta sobre o conhecimento. As aulas visaram apoiar os alunos na reflexão critica com base na situação - problema “o que é o conhecimento?” A prática letiva sobre o conhecimento visou avaliar a qualidade do modelo elenchos na aprendizagem. O debate aberto e objetivo poderá proporcionar conhecimentos mais profundos e interessantes para os alunos. A descoberta de que não sabemos e que nos encontramos num contínuo processo de aprendizagem é determinante na sociedade atual. A filosofia pode assim dar um contributo decisivo no encontro de novas formas de organizar e construir a vida pessoal e social.
- Development of a new microcarrier culture based in matrix of natural polymerPublication . Costa, Emanuel Fonseca Dinis; Passarinha, Luís António Paulino; Sousa, Ângela Maria Almeida deGellan gum is a low cost polysaccharide manufactured by microbial fermentation of the Sphingomonas paucimobilis microorganism. This polymer is commonly used in food and pharmaceutical industry. It can be dissolved in water, and when heated and mixed with mono or divalent cations, forms a gel upon lowering the temperature under mild conditions. Gellan gum can be found in two forms, one with high acetylate content, called high acyl gellan gum and other form with low acetylate content, called low acyl gellan gum. Each form of gellan gum presents different gel characteristics. Microcarrier cell culture seems to be a promising method for the growth of large amounts of cells. This technique has been used not only for the production of pharmaceuticals but also in biomedical engineering and in drug screening using 3D cell culture. However microcarriers available on the market have some disadvantages such as opacity, low density or low porosity. Also the large diameter of the macroporous microcarriers makes them disadvantageous for some functions such as viewing adhered cells. But the main disadvantage lies in the high cost of processing. Bringing together these two topics, the aim of this work was create a new microcarrier made by the conjugation of the two forms of gellan gum. To achieve this aim, the work was divided in two main topics, the production and recovery of high acyl gellan gum and the development and characterization of the microcarrier structure. For the production and recovery of high acyl gellan gum, different procedures were tested and results revealed that medium with low nitrogen source and salt solution containing 10 g/L of Na2HPO4, 3 g/L of KH2PO4, 1 g/L of K2SO4, 1 g/L of NaCL, 0.2 g/L of MgSO4.7H2O, 0.01 g/L of CaCl2, 0.001 g/L of FeSO4.7H2O is more suitable for the growth of bacteria. The procedure of two centrifugation steps showed the best results for the removal of bacteria content. In addition, acetonitrile was the organic solvent that showed the best results for the precipitation of high acyl gellan gum compared to the other organic solvent tested (isopropanol, ethanol and acetone). In the second phase of the project was used the combination of gellan gum of high and low acetylation to develop a new microcarrier for cell culture. The combination of these two forms is related to the fact of trying to decrease the density of negative charges of low acyl gellan gum by using gellan gum high acetylation. Furthermore it was also desired to analyse the effect of the two forms in the swelling capacity and the degree of porosity of the final microcarrier. For this aim was then developed an experimental design in order to get the possible combinations between the concentrations of gellan gum high (0%, 1%, 1.5%, 2%, 2.5%, 3%) and low acetylation (0%, 0,16% , 12:33%, 0.5%). The water-in-oil emulsion technique was applied to the construction of microcarrier structures. The microcarriers developed were then evaluated for porosity degree by mercury microporosimetry and for swelling ability by the difference between the hydrated and lyophilized form of microcarrier. Through the results obtained, two initial models for the prediction of swelling behaviour and porosity degree were developed. Scanning electron microscopy was also performed to visualize the topographic surface of the microcarrier. Microcarriers with high (1.672 m2/g) and low level of porosity (0.209m2/g) were chosen for a cell culture assay and demonstrated similar behaviour regarding cell adhesion. The ability to adsorb compounds with positive charge was proved with a bovine serum albumin adsorption study by the surface of the microcarrier. In overall, these results suggest that the gellan microcarriers show advantageous characteristics that can be used for microcarrier cell culture. However more studies are needed in order to improve the microcarrier characteristics.
- Modelização VAR da Volatilidade dos Preços do Ouro e dos Índices dos Mercados FinanceirosPublication . Antunes, João Marques; Fuinhas, José Alberto Serra Ferreira Rodrigues; Marques, António Manuel CardosoA interação da volatilidade entre os mercados financeiros e o mercado do ouro é analisada. A volatilidade do preço do ouro em euros, do preço do ouro em dólares, do índice de produção industrial americano, do índice S&P500, do índice VIX e do índice PSI-20 são usados para um horizonte temporal compreendido entre Janeiro de 1993 a Setembro 2013. Recorrendo ao modelo Generalized Autoregressive Conditional Heteroscedasticity. A transmissão das volatilidades é efetuada recorrendo ao modelo Vector Autoregressive. Todas as variáveis revelaram-se endógenas à exceção do ouro que foi modelizado como exógeno. Foi detetada a causalidade de Granger das variáveis IPI?S&P500; S&P500?VIX; VIX?PSI20. A análise da decomposição da variância assinala a prevalência da explicação da própria variável. Através destes modelos provamos que existe uma relação entre a volatilidade dos preços do ouro e os mercados financeiros.