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- Nanosistema de entrega de fármacos para tratamento de infeções por HPVPublication . Lopes, Ana Catarina Gonçalves; Cruz, Carla Patrícia Alves Freire MadeiraSequências de oligonucleótidos de DNA e RNA ricas em guaninas podem associar-se inter ou intramolecularmente para formar estruturas de quatro cadeias que se designam G-quadruplex (G4). Vários oligodesoxinucleótidos de G4 têm sido alvo de estudo como potenciais agentes diagnóstico e terapêuticos funcionando como aptameros, pois têm interação específica com proteínas alvo que podem encontrar-se à superfície das células. Entre estes alvos está a nucleolina (NCL), proteína multifuncional sobrexpressa à superfície das células cancerosas, sendo por isso um alvo para o desenvolvimento estratégias para o diagnóstico e terapia do cancro. Entre os diversos aptameros G4 destaca-se o AS1411, que é um aptamero que se liga à NCL e inibe o crescimento de células cancerosas sem afetar as células normais, tendo sido alvo de ensaios clínicos humanos de fases 1 e 2. O seu comportamento seletivo tem sido de particular interesse nos últimos anos para a entrega de agentes terapêuticos ou de imagem em células cancerosas; pelo que a procura de novas estratégias com vista a melhoria das propriedades deste aptamero G4 é um foco de estudo crescente. As modificações químicas no G4 AS1411 e a formação dos conjugados com ligandos de G4, constituem uma estratégia promissora para explorar o seu potencial terapêutico e constituem a base para a formação e otimização de nanosistemas conjugados aptamero-ligando. Neste trabalho são reportados ensaios biofísicos e in vitro de derivados de fenantrolina e derivados de laranja de acridina usados para estabilizar um derivado do AS1411, designado AT11-L0. Também é proposta a síntese de novos ligandos derivados de fenantrolina. Relativamente aos ensaios biofísicos, a espectroscopia de discroísmo circular (CD) confirmou a existência de uma estrutura G4 paralela para o AT11-L0 em tampão 65 mM KCl + 20 mM K2HPO4/KH2PO4. As experiências de CD-melting demonstraram que os ligandos que provocaram maior estabilização térmica da estrutura do G4 AT11-L0 foram os derivados de laranja de acridina C8-NH2 e o C8, com ?Tm = 26,6 ºC e 23,9 ºC, respetivamente a 4 equivalentes molares. As titulações de fluorescência indicaram valores de KD entre 10-6 - 10-7 (M-1) para os ligandos derivados de laranja de acridina e de fenantrolina, indicativos de ligandos de G4 com afinidade média a elevada. Sendo que, os ligandos com maior afinidade para o AT11-L0 foram o derivado de laranja de acridina C8-NH2 (KD = 3,2×10-7 (M-1)) e o derivado de fenantrolina [32]phen2N4 (KD = 2,7×10-7 (M-1)). Já os ensaios in vitro foram levados a cabo em células HeLa vs NHDF. Foram realizados ensaios de citotoxicidade (MTT) para determinar o IC50 dos ligandos C8-NH2, C8, C5, C3 e [16]phenN2 e posteriormente para avaliar a citotoxicidade dos conjugados AT11-L0-C8, AT11-L0-C8-NH2, AT11-L0-C5, AT11-L0-C3. Os ligandos demonstraram ser citotóxicos para ambas as linhas celulares, com valores de IC50 entre 0,15 µM e 3,51 µM. Os nanosistemas conjugados aptamero-ligando demonstraram ser citotóxicos e seletivos para células HeLa. Foram ainda levados a cabo estudo de colocalização em células HeLa com o conjugado AT11-L0 - C8, através de microscopia de fluorescência confocal. Verificou-se localização preferencial dos ligandos no nucléolo das células HeLa, a internalização do aptamero AT11-L0, bem como a formação do conjugado aptamero-ligando e a sua internalização nas células. No geral, estes resultados demonstraram ser promissores para o desenvolvimento de futuros nanosistemas envolvendo aptameros G4 derivados do AS1411, conjugados com ligandos de G4 derivados de laranja de acridina e de fenantrolina.
- Testing the application of new chemical formulations for neurological disease therapiesPublication . David, Emanuel Silva; Cristóvão, Ana Clara Braz; Sousa, Ana Catarina; Freire, Mara G.Parkinson’s Disease (PD) is a multifactorial neurodegenerative disease, characterised by a decrease in the dopamine levels released by the dopaminergic neurons, the formation of Lewis bodies, formed mainly by a-synuclein and by the death of dopaminergic neurons of the substantia nigra. Several different mechanisms are dysregulated in Parkinson’s disease such as the inflammatory process; the dysfunction of mitochondria; the synthesis and degradation of dopamine and the activation of NADPH oxidases, all resulting in the production of reactive oxygen species (ROS) in large quantity which originates a highly oxidative environment in the dopaminergic neurons. Given the high importance of oxidative stress in Parkinson’s Disease, it is of particular interest the use of antioxidants in the treatment of this disease, such as vanillic acid, syringic acid and salicylic acid. However, these compounds present low solubility and low bioavailability which makes impracticable their use in the treatment of Parkinson’s Disease. Thus, in this thesis, new formulations of cholinium-based ionic liquids were used in order to increase the solubility and therefore the bioavailability od these compounds. For each ILs based antioxidant and its respective precursor, cytotoxicity and neuroprotection tests were performed in the dopaminergic neurons cell line (N27). The obtained results disclosed that vanillic acid, syringic acid, salicylic acid, cholinium vanillate, cholinium syringate and cholinium salicylate do not present cytotoxicity to dopaminergic neurons. Furthermore, it was also possible to conclude that none of the tested compounds (precursors and respective ionic liquids) exhibited neuroprotective characteristics in the three different in vitro models of PD tested.
- Qualidade de Vida e Satisfação no Trabalho para Gestores de Unidades de SaúdePublication . Pereira, Viviam Carla Godinho; Nunes, António João SantosEsta investigação teve como propósitos analisar a qualidade de vida e satisfação no trabalho de gestores de unidades de saúde brasileiros, procurando identificar através de quatro grandes dimensões caracterizadas pelos domínios físico, psicológico, pessoal e profissional quais são os fatores intervenientes na qualidade de vida desses profissionais. Procurou-se também compreender se as características sociodemográficas são influenciadoras dessa qualidade de vida. O instrumento de análise escolhido para essa investigação foi questionário QWLQ – bref, que analisa as variáveis da qualidade de vida no trabalho, encontrando-se subdividido por quatro domínios, físico/saúde, psicológico, pessoal e profissional. As variáveis utilizadas para o levantamento sociodemográfico foram: região, género, estado civil, faixa etária, nível de escolaridade, rendimentos, tipo de contrato e tempo de trabalho. As respostas foram baseadas nas últimos duas semanas trabalhadas, para estabelecer um padrão e garantir os resultados dos índices de QVT (Qualidade de vida no Trabalho) sejam referentes ao mesmo período para todos os trabalhadores. A amostra foi composta por 117 profissionais de saúde, de 3 estados e 19 cidades brasileiras, com idade variando entre 26 a 65 anos. Contrariando as expectativas foi possível concluir que no geral os gestores de unidades de saúde apresentavam-se satisfeitos com sua qualidade de vida no trabalho, porém as características sociodemográficas podem ser influenciadoras para melhor ou pior a qualidade de vida, principalmente no que se refere ao domínio físicos/saúde.
- Potencial terapêutico de miR-9 e miR-29 na doença de AlzheimerPublication . Baptista, Bruno Miguel Cameira; Sousa, Fani Pereira de; Pereira, Patrícia Alexandra NunesA demência é uma síndrome que está relacionada com a idade, apresenta várias causas e são raras as que se podem tratar ou prevenir eficazmente. A forma de demência mais frequente é a doença de Alzheimer, uma doença cerebral progressiva e degenerativa, irreversível e sem cura. A doença de Alzheimer é caracterizada por várias alterações morfológicas/patológicas, sendo as principais a acumulação extracelular de péptidos ß-amilóides, denominados como placas Aß, assim como a acumulação intracelular da proteína tau, a qual está associada a lesões intraneuronais e fibrilares que consistem em agregações de filamentos helicoidais emparelhados, compostos pela proteína tau hiperfosforilada, associada a microtúbulos, também conhecidos como emaranhados neurofibrilares. Diversas evidências mostram ainda que a acumulação de péptidos Aß leva também a um aumento da severidade da patologia tau. Como referido, atualmente a doença de Alzheimer, bem como outras doenças neurodegenerativas, não apresentam cura e as terapias existentes apenas diminuem temporariamente os sintomas. Desta forma uma abordagem promissora poderá ser a utilização de certos miARNs para o silenciamento da expressão de várias proteínas envolvidas no surgimento e progressão da doença de Alzheimer. Os miARNs representam a classe de ARNs não codificantes que atuam como potentes reguladores da pós-transcrição da expressão génica. Desta forma através dos microARNs consegue-se a inibição pós-transcricional da expressão das respetivas proteínas, causadoras do surgimento e progressão de várias doenças. Este trabalho teve como principal objetivo avaliar o efeito do pre-miR-9 e pre-miR-29, como agentes terapêuticos na DA, procurando a diminuição da expressão de proteínas alvo envolvidas na patologia, nomeadamente a APP, BACE1 e presenilina, na linha celular N2a695. Com a realização do projeto verificou-se que tanto o pre-miR-9, como o pre-miR-29b têm efeito nas proteínas da via amilóide em estudo. De forma geral foi observado um maior efeito pelo pre-miR-9 na APP e na presenilina e um maior efeito do pre-miR-29b na BACE1. No entanto foi ainda obtido um maior silenciamento da expressão da presenilina por parte do pre-miR-29b em estudos de western blot mas, por RT-qPCR e imunocitoquímica não se verificou uma diferença significativa entre a sinergia do pre-miR-9 e pre-miR-29b e o seu uso individual. Relativamente à BACE1 verificou-se um silenciamento superior após transfeção das células com o pre-miR-29b relativamente ao pre-miR-9 ou à co-transfeção com ambos os pre-miARNs. Em relação à APP verificou-se a inibição da sua expressão, induzida quer pelo pre-miR-9 quer pelo pre-miR-29b, isoladamente ou transferidos em simultâneo. Em suma, com o trabalho realizado foi possível verificar uma relação quer do pre-miR-9, quer do pre-miR-29b na regulação da expressão das proteínas estudadas (presenilina, BACE1 e APP). Num futuro próximo, pretende-se confirmar e aprofundar esta análise, especialmente nos casos que não foram previamente reportados. De uma forma mais específica, será interessante confirmar a ação regulatória do pre-miR-29b sobre a expressão da presenilina, assim como confirmar a possível relação destes pre-miRs com o silenciamento da expressão da APP, que não foram ainda evidenciados na literatura. O conhecimento e melhor compreensão destas vias associadas ao silenciamento génico é de extrema importância, visto que estes pre-miRs poderão ser agentes terapêuticos com interesse de aplicação no tratamento da doença de Alzheimer.
- Análise experimental do dano por frio no pêssego para diferentes condições de conservaçãoPublication . Rodrigues, Cristina Marisa Mendes; Gaspar, Pedro Miguel de Figueiredo Dinis Oliveira; Simões, Maria Paula Albuquerque FigueiredoO pêssego é um fruto de caroço que apresenta uma polpa carnuda muito suculenta, uma pele suave e um sabor que satisfaz o paladar mais exigente. Em Portugal, a principal região produtora de pêssego é a Beira Interior, devido às suas condições edafoclimáticas particularmente favoráveis a esta cultura. Sendo o pêssego um fruto que se deteriora e amadurece muito rapidamente à temperatura ambiente, existe necessidade de conservar e armazenar o fruto em condições controladas e modificadas, prolongando a vida útil e preservando as suas características organoléticas. A conservação pelo frio é o método mais utilizado para atrasar o processo de maturação e posterior deterioração, permitindo prolongar o período de oferta e comercialização. No entanto, este processo de conservação pode provocar alterações internas no fruto vulgarmente designadas por dano por frio. Este distúrbio fisiológico é induzido por baixas temperaturas, e caracteriza-se por alterações da textura da polpa que afeta a qualidade do fruto alterando significativamente as características organoléticas do pêssego, sem ser visível exteriormente. Na presente dissertação são apresentados resultados de uma análise experimental realizada com a cultivar Royal Time produzida na região da Beira Interior, avaliando o efeito da conservação em câmaras de refrigeração de três produtores distintos da região, durante um período de 44 dias, sendo retirada do frio uma sub-amostra de 24 frutos cada 7 dias, dos quais 50% foram analisados no dia de saída do frio e os restantes 50% após 2 dias à temperatura ambiente. A caracterização de uma amostra inicial, correspondente à colheita (Tzero), permitiu verificar que os pêssegos tinham um peso médio de 180,4 g, um IR de 10,63 ºBrix e uma dureza média de 5,07 kg/0,5cm2. Este estudo permitiu verificar que um armazenamento a frio apresenta condições de conservação ideais para o fruto quando a temperatura está compreendida entre os -0,5ºC - 2,2ºC e a humidade relativa do ar na ordem dos 100%. Estas condições proporcionam um dano por frio em menor escala, um menor número de frutos deteriorados e melhores oportunidades de comercialização.