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Abstract(s)
Introduction: Blood transfusions are associated with transfusion related inflammatory and immunomodulatory effects. Although residual leukocytes present in the transfused red blood cell units have been implicated in these effects, clinical trials of leukoreduction have shown conflicting results. Our previous in vitro studies with human T cells have demonstrated that red blood cells (RBC), either autologous or heterologous, have cell growth and survival bioactivities that allow activated T cells to enter consecutive cycles of cell division. However, these studies did not characterize expression of CD28, an important receptor for naïve T cells that is lost by most CD8+ T cells during aging and chronic inflammation. Objective: The purpose of this study was to use our in vitro model of blood transfusion to analyze the extent of proliferation and the expression of CD28 on CD4+ and CD8+ T cells. Methods: Peripheral blood mononuclear cells were isolated from blood samples of regular blood donors and iron overloaded phlebotomized patients after centrifugation over Lymphoprep, labeled with carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, a fluorescent dye that allows monitoring of cell division, and cultured for 6 days with the polyclonal T cell mitogen phytohaemagglutinin (PHA) in the absence or presence of red blood cells at a 50:1 RBC to PBMC ratio. Afterwards, cells were harvested, labeled with fluorochrome-conjugated antibodies against CD4, CD8 and CD28, acquired in a flow cytometer, and proliferation and expression of CD28 determined. Results: T cells proliferated more vigorously when RBC were present in the culture. Dividing CD8+ T cells showed a higher loss of CD28 than CD4+ T cells, namely in cultures with red blood cells. As a result, the percentage of CD8+CD28- T cells increased at the end of the culture period. Finally, a tendency to downregulate CD28 expression with each cell division is seen in cultures with PHA+RBC. In cultures with PHA alone a tendency to increase the values of CD28 is observed in CD4+. Conclusions & Discussion: This preliminary study suggests that red blood cells induce a population of CD8+CD28- T cells by promoting CD28 downregulation. Taking into consideration that CD8+CD28- T cells contain both immunosuppressive and inflammatory lymphocytes, these results may be relevant in the context of human pathologies where blood transfusions are needed.
Introdução: As transfusões de eritrócitos estão associadas a efeitos imunomoduladores e inflamatórios. Apesar dos leucócitos residuais presentes nas unidades de sangue transfusional terem sido implicados nestes efeitos, ensaios clínicos com leucorredução mostram efeitos controversos. Estudos prévios realizados pelo nosso grupo demostraram que os eritrócitos, quer autólogos quer heterólogos, possuem bioatividades que favorecem o crescimento e a sobrevivência de linfócitos T activados in vitro, permitindo-lhes entrar em ciclos de divisão consecutivos. Contudo, esses estudos não caracterizaram a expressão de CD28, um receptor importante para a activação de linfócitos T naïve que deixa de ser expresso pela maior parte dos linfócitos T CD8+ com a idade, e em condições inflamatórias. Objetivo: A finalidade deste estudo foi utilizar um modelo in vitro de transfusão de eritrócitos para analisar a proliferação e expressão de CD28 nos linfócitos T CD4+ e CD8+. Métodos: Foram isoladas células mononucleares de sangue periférico de dadores saudáveis e de pacientes flebotomizados após centrifugação sobre um gradiente de densidade (Lymphoprep), marcadas com carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE), um corante fluorescente que permite a monotorização da divisão celular, e cultivadas durante 6 dias com fitohemaglutinina (PHA), um mitogénio policlonal de linfócitos T, na ausência ou presença de eritrócitos numa proporção 50RBC:1PBMC. As células foram colhidas e marcadas com anticorpos conjugados com fluorocromos contra os receptores CD4, CD8 e CD28, e depois adquiridas em um citómetro de fluxo para determinação da proliferação e a expressão de CD28. Resultados: Os linfócitos T proliferaram mais vigorosamente em culturas com eritrócitos. A proliferação esteve associada com a perda do receptor CD28, parecendo mais evidente nos linfócitos T CD8+. Isto resultou num aumento da percentagem de linfócitos CD8+CD28- no fim do período de cultura. Nas culturas com PHA há uma tendência para o aumento na expressão do CD28 nos linfócitos CD4+. Conclusão e Discussão: Este estudo preliminar sugere que os eritrócitos induzem a formação de linfócitos CD8+CD28- através da perda de expressão do receptor CD28. Considerando que os linfócitos T CD8+CD28- contem quer células imunossupressoras quer inflamatórias, estes resultados podem ser relevantes no contexto de patologias humanas onde as transfusões são necessárias.
Introdução: As transfusões de eritrócitos estão associadas a efeitos imunomoduladores e inflamatórios. Apesar dos leucócitos residuais presentes nas unidades de sangue transfusional terem sido implicados nestes efeitos, ensaios clínicos com leucorredução mostram efeitos controversos. Estudos prévios realizados pelo nosso grupo demostraram que os eritrócitos, quer autólogos quer heterólogos, possuem bioatividades que favorecem o crescimento e a sobrevivência de linfócitos T activados in vitro, permitindo-lhes entrar em ciclos de divisão consecutivos. Contudo, esses estudos não caracterizaram a expressão de CD28, um receptor importante para a activação de linfócitos T naïve que deixa de ser expresso pela maior parte dos linfócitos T CD8+ com a idade, e em condições inflamatórias. Objetivo: A finalidade deste estudo foi utilizar um modelo in vitro de transfusão de eritrócitos para analisar a proliferação e expressão de CD28 nos linfócitos T CD4+ e CD8+. Métodos: Foram isoladas células mononucleares de sangue periférico de dadores saudáveis e de pacientes flebotomizados após centrifugação sobre um gradiente de densidade (Lymphoprep), marcadas com carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE), um corante fluorescente que permite a monotorização da divisão celular, e cultivadas durante 6 dias com fitohemaglutinina (PHA), um mitogénio policlonal de linfócitos T, na ausência ou presença de eritrócitos numa proporção 50RBC:1PBMC. As células foram colhidas e marcadas com anticorpos conjugados com fluorocromos contra os receptores CD4, CD8 e CD28, e depois adquiridas em um citómetro de fluxo para determinação da proliferação e a expressão de CD28. Resultados: Os linfócitos T proliferaram mais vigorosamente em culturas com eritrócitos. A proliferação esteve associada com a perda do receptor CD28, parecendo mais evidente nos linfócitos T CD8+. Isto resultou num aumento da percentagem de linfócitos CD8+CD28- no fim do período de cultura. Nas culturas com PHA há uma tendência para o aumento na expressão do CD28 nos linfócitos CD4+. Conclusão e Discussão: Este estudo preliminar sugere que os eritrócitos induzem a formação de linfócitos CD8+CD28- através da perda de expressão do receptor CD28. Considerando que os linfócitos T CD8+CD28- contem quer células imunossupressoras quer inflamatórias, estes resultados podem ser relevantes no contexto de patologias humanas onde as transfusões são necessárias.
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Keywords
Cd28 Eritrócitos Linfócitos T Cd8+ Transfusão