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Abstract(s)
Easy access to human biological samples and respective detailed clinical information is pivotal
to the progress of medical knowledge, contributing to minimize the direct and indirect health
costs and improve the quality of life. The concept of biobank was born in this context, as an
infrastructure composed by collections of biological samples and respective clinical
information.
The impact of biobanks is measured by the presence of good quality samples associated with
clinical information. Biobanco-IMM, so far, has more than 80000 samples from more than
10000 donors being the most frequent sample type the serum. Quality control of serum
sample has been the subject of intense debate in European meetings of biobanks. Therefore,
this study aims to find potential biomarkers for quality control of the serum samples stored at
Biobanco-IMM.
200 serum samples were grouped according to the time after sampling, time to freezing,
duration of storage or number of freeze-thaw cycles and were compared with a control group
of samples that were processed according to the Biobanco-IMM standards. CD40L, GM-CSF, IL-
1a, G-CSF and VEGF were measured in the serum by ELISA.
The results show that IL-1a and G-CSF have significant differences in the study groups wherein
the analysis of the ROC curves found a cutoff of 33.9 pg/ml with 100% sensitivity for IL-1a,
and a cutoff of 78.4 pg/mL with 65% specificity to G-CSF. Thus, these can act as biomarkers
for serum quality control.
A necessidade do rápido acesso a amostras biológicas humanas e respetiva informação clínica com elevada qualidade é fundamental para o avanço científico e médico, contribuindo para a redução dos custos diretos e indiretos com a saúde, bem como para uma melhoria na qualidade de vida dos doentes. É neste contexto que nasce o conceito de biobanco, uma infra-estrutura composta por coleções de amostras biológicas e respetiva informação clínica. O impacto dos biobancos é medido pela presença de amostras de boa qualidade com informação clínica detalhada. O Biobanco-IMM tem até agora mais de 80 mil amostras de mais de 10000 dadores, sendo a amostra mais frequente o soro. O controlo de qualidade de amostras do soro tem sido objeto de grande debate. Desta forma, este estudo tem como objetivo encontrar possíveis biomarcadores de controlo de qualidade para as amostras de soro armazenadas no Biobanco-IMM. A qualidade das amostras de soro pode ser afetada por inúmeros fatores, como por exemplo, o aumento do tempo até centrifugação e o aumento do tempo até congelação que podem influenciar a cascata de coagulação. Por sua vez o tempo de centrifugação e a exposição a temperaturas elevadas influenciam a eficiência de separação de células. Os próprios componentes poliméricos que podem ser libertados pelos vários tipos de tubos de colheita, podem afetar alguns imunoensaios. Desta é crucial a identificação de marcadores biológicos que sejam sensíveis o suficiente para avaliar a qualidade das amostras aquando de desvios ao processamento, como o aumento do tempo até processamento e congelamento, a duração do armazenamento e do número de ciclos de congelamento e descongelamento. Um bom biomarcador sérico para avaliar a qualidade do soro deve ser transversal a todas as amostras, sejam elas provenientes de dadores com patologia ou saudáveis e mostra uma perda de atividade significativa em condições inadequadas de armazenamento. No que respeita à qualidade das amostras de soro, várias moléculas têm sido propostas para o controlo de qualidade, por exemplo: Receptor da Transferrina, Ácido Ascórbico, Potássio, GMCSF, IL-1a, G-CSF, péptidos C3F, fibrinopeptide A, ACTH, CD40L, VEGF e MMP-7. Neste estudo focamo-nos em 5 proteínas (CD40L, GM-CSF, IL-1a, G-CSF e VEGF) que estão presentes no soro, que de acordo com a literatura, podem ser utilizados como biomarcadores para o seu controlo de qualidade. Estas moléculas são as que atualmente possuem maior número de referências na literatura e são apontadas como sendo as indicadas para verificar a qualidade das amostras com os seguintes desvios ao procedimento: aumento do tempo de précentrifugação, aumento do tempo até congelamento, número de ciclos de congelamento e descongelamento e tempo de armazenamento. Neste trabalho, 200 amostras foram dividas em 5 grupos de estudo: controlos, tempo até centrifugação, tempo até congelamento, ciclos de congelamento/descongelamento e tempo de armazenamento. Os níveis dos séricos de CD-40L, GM-CSF, IL-1a, G-CSF e VEGF quantificados por ELISA. Os resultados mostram que IL-1a e G-CSF possuem diferenças significativas nos grupos de estudo sendo que da análise das curvas ROC se estabeleceu um cutoff de 33.9 pg/ml com 100% de sensibilidade para IL-1a e um cutoff de 78.4 pg/ml com 65% de especificidade para o G-CSF. Desta forma estes poderão ser apontados como biomarcadores para o controlo de qualidade de amostras de soro.
A necessidade do rápido acesso a amostras biológicas humanas e respetiva informação clínica com elevada qualidade é fundamental para o avanço científico e médico, contribuindo para a redução dos custos diretos e indiretos com a saúde, bem como para uma melhoria na qualidade de vida dos doentes. É neste contexto que nasce o conceito de biobanco, uma infra-estrutura composta por coleções de amostras biológicas e respetiva informação clínica. O impacto dos biobancos é medido pela presença de amostras de boa qualidade com informação clínica detalhada. O Biobanco-IMM tem até agora mais de 80 mil amostras de mais de 10000 dadores, sendo a amostra mais frequente o soro. O controlo de qualidade de amostras do soro tem sido objeto de grande debate. Desta forma, este estudo tem como objetivo encontrar possíveis biomarcadores de controlo de qualidade para as amostras de soro armazenadas no Biobanco-IMM. A qualidade das amostras de soro pode ser afetada por inúmeros fatores, como por exemplo, o aumento do tempo até centrifugação e o aumento do tempo até congelação que podem influenciar a cascata de coagulação. Por sua vez o tempo de centrifugação e a exposição a temperaturas elevadas influenciam a eficiência de separação de células. Os próprios componentes poliméricos que podem ser libertados pelos vários tipos de tubos de colheita, podem afetar alguns imunoensaios. Desta é crucial a identificação de marcadores biológicos que sejam sensíveis o suficiente para avaliar a qualidade das amostras aquando de desvios ao processamento, como o aumento do tempo até processamento e congelamento, a duração do armazenamento e do número de ciclos de congelamento e descongelamento. Um bom biomarcador sérico para avaliar a qualidade do soro deve ser transversal a todas as amostras, sejam elas provenientes de dadores com patologia ou saudáveis e mostra uma perda de atividade significativa em condições inadequadas de armazenamento. No que respeita à qualidade das amostras de soro, várias moléculas têm sido propostas para o controlo de qualidade, por exemplo: Receptor da Transferrina, Ácido Ascórbico, Potássio, GMCSF, IL-1a, G-CSF, péptidos C3F, fibrinopeptide A, ACTH, CD40L, VEGF e MMP-7. Neste estudo focamo-nos em 5 proteínas (CD40L, GM-CSF, IL-1a, G-CSF e VEGF) que estão presentes no soro, que de acordo com a literatura, podem ser utilizados como biomarcadores para o seu controlo de qualidade. Estas moléculas são as que atualmente possuem maior número de referências na literatura e são apontadas como sendo as indicadas para verificar a qualidade das amostras com os seguintes desvios ao procedimento: aumento do tempo de précentrifugação, aumento do tempo até congelamento, número de ciclos de congelamento e descongelamento e tempo de armazenamento. Neste trabalho, 200 amostras foram dividas em 5 grupos de estudo: controlos, tempo até centrifugação, tempo até congelamento, ciclos de congelamento/descongelamento e tempo de armazenamento. Os níveis dos séricos de CD-40L, GM-CSF, IL-1a, G-CSF e VEGF quantificados por ELISA. Os resultados mostram que IL-1a e G-CSF possuem diferenças significativas nos grupos de estudo sendo que da análise das curvas ROC se estabeleceu um cutoff de 33.9 pg/ml com 100% de sensibilidade para IL-1a e um cutoff de 78.4 pg/ml com 65% de especificidade para o G-CSF. Desta forma estes poderão ser apontados como biomarcadores para o controlo de qualidade de amostras de soro.
Description
Keywords
Biobanking Biomarker Quality Control Serum