Publication
Purificação de DNA plasmídico usando tecnologias de membrana : modelação e aplicação
| dc.contributor.advisor | Morão, António Miguel Parreira Cabral Forjaz | |
| dc.contributor.advisor | Queiroz, João António de Sampaio Rodrigues | |
| dc.contributor.author | Nunes, José Carlos Morgado | |
| dc.date.accessioned | 2015-05-05T10:39:15Z | |
| dc.date.available | 2015-05-05T10:39:15Z | |
| dc.date.issued | 2013-10 | |
| dc.description.abstract | Com o crescente interesse na utilização de DNA plasmídico para terapia génica e para formulação de vacinas de DNA, surgiu a necessidade de estudar e desenvolver esquemas de purificação desta biomolécula. As tecnologias de separação com membranas são usadas em diversos tipos de processos a nível das aplicações em biotecnologia, tais como esterilização, separação sólido-líquido, concentração, troca de tampão e purificação de diversos tipos de moléculas. As técnicas de filtração com membranas apresentam normalmente vantagens em relação a outras técnicas alternativas como seja o reduzido impacto ambiental e económico, maior facilidade de aumento de escala (“scale-up”), maior produtividade dos equipamentos e maior facilidade de automatização e controlo dos processos. Entre as principais desvantagens contam-se normalmente problemas relacionados com a colmatação das membranas, os custos de substituição periódica das mesmas e a menor seletividade nas separações em certos casos. No âmbito do presente trabalho foi efetuadoumestudo fundamental da transmissão deDNAplasmídico (pDNA), nomeadamente na forma superenrolada, através de membranas de micro e ultrafitração. O estudo incluiu a modelação do processo, com base na teoria do transporte restringido de macrosolutos através de poros estreitos, tendo sido estabelecido um novo modelo para a permeação de moléculas longas e flexíveis, tais como o pDNA e o RNA. Estudou-se igualmente a aplicação de membranas ao isolamento de DNA plasmídico a partir de caldos de fermentação. Nomeadamente foi estudada a microfiltração de lisados e a ultrafiltração dos permeados de microfiltração obtidos com vista à concentração e purificação do DNA plasmídico antes da purificação cromatográfica, passo indispensável no processo de recuperação para assegurar o cumprimento dos padrões de qualidade requeridos pelas agências reguladoras do produto final. Efetuou-se também um estudo de otimização da operação de ultrafiltração, baseado na otimização da separação pDNA/RNA. Os estudos de aplicação realizados permitem perspetivar a utilização da microfiltração e ultrafiltração nos processos industriais de recuperação de pDNA, como alternativas vantajosas às operações de centrifugação dos lisados para remoção dos detritos celulares e a operações alternativas no isolamento intermediário de pDNA, tais como precipitações seletivas com álcoois e sais, extrações líquidolíquido, entre outras. A microfiltração será vantajosa na medida em que permite o processamento dos caldos lisados em condições muito mais suaves do que nas centrífugas industriais onde os fluidos estão sujeitos a fortes tensões de corte que, como é sabido, podem danificar a estrutura dos plasmídeos irreversivelmente. A ultrafiltração permite eliminar o consumo de grandes volumes de álcoois, tais como o isopropanol e de sais, tais como sulfato de amónio ou cloreto de cálcio, o que representa uma enorme vantagem económica e ambiental. | por |
| dc.identifier.tid | 101319924 | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.6/3306 | |
| dc.language.iso | por | por |
| dc.subject | DNA plasmídico - Ultrafiltração - Modelação matemática | por |
| dc.subject | DNA plasmídico - Microfiltração - Modelação matemática | por |
| dc.subject | Ácido desoxirribonucleico (DNA) - Purificação | por |
| dc.subject | Ácido ribonucleico (RNA) - Purificação | por |
| dc.title | Purificação de DNA plasmídico usando tecnologias de membrana : modelação e aplicação | por |
| dc.type | doctoral thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| rcaap.rights | openAccess | por |
| rcaap.type | doctoralThesis | por |
| thesis.degree.discipline | Química | por |
| thesis.degree.level | Doutor | por |
| thesis.degree.name | Doutoramento em Química | por |
Files
Original bundle
1 - 1 of 1
No Thumbnail Available
- Name:
- tese.pdf
- Size:
- 4.39 MB
- Format:
- Adobe Portable Document Format
- Description:
- Documento principal
License bundle
1 - 1 of 1
No Thumbnail Available
- Name:
- license.txt
- Size:
- 1.71 KB
- Format:
- Item-specific license agreed upon to submission
- Description: