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Authors
Abstract(s)
Lung cancer (LC) has the greatest impact on mortality rates worldwide, particularly nonsmall cell lung cancer (NSCLC). The treatment of NSCLC depends on the stage of the
disease and may involve a combination of surgery, chemotherapy, radiotherapy or
immunotherapy. However, these therapies have some limitations, since that most
patients develop resistance to treatments and also have side effects. In this sense, the
aptamers have emerged as a promising strategy in delivery systems for NSCLC therapies.
Aptamers are known as chemical antibodies since they can bind to proteins with high
specificity. In addition, they have several advantages over antibodies, such as great
stability and lower immunogenicity. AT11-L2 is a derivative of the AS1411 aptamer that
contain a guanine-rich sequence capable of adopting a G-quadruplex (G4) structure and
therefore targets nucleolin (NCL), a protein overexpressed in the cell membrane of
NSCLC cells. Thus, the aim of this study was to develop two liposomal systems containing
encapsulated doxorubicin and BRACO-19 and AT11-L2 on the surface to target NCL. To
this end, the structure of AT11-L2 was first characterized by biophysical studies, and then
the interaction of the aptamer with the ligands was studied through molecular dynamics
simulations. In addition, the potential of the ligands to stabilize AT11-L2 was also
assessed by biophysical studies. Liposomes were then synthesized and characterized.
Finally, the selectivity and cellular uptake of the functionalized liposomes containing the
compounds were tested on human alveolar basal epithelial adenocarcinoma cells (A549)
and human fetal lung fibroblast cells (MRC-5). The results showed that AT11-L2 adopts
a G4 structure in the presence of K+ and when associated with PhenDC3 through p-p
stacking interactions, increases its stability. In addition, the AT11-L2/NCL complex was
shown to have a high affinity with a KD in the nanomolar range. In vitro studies showed
that functionalized liposomes containing BRACO-19 and doxorubicin were selectively
internalized by cancer cells, with greater selectivity being recorded for liposomes with
doxorubicin. These results show the therapeutic potential of liposomes functionalized
with AT11-L2 against NSCLC.
O cancro do pulmão (CP) é uma das doenças oncológicas com maior impacto na taxa de mortalidade em todo o mundo, particularmente o cancro do pulmão de não pequenas células (CPNPC). O tratamento do CPNPC depende do estadio da doença e pode envolver uma combinação de terapias, tais como cirurgia, quimioterapia, radioterapia ou imunoterapia. No entanto, algumas abordagens apresentam limitações, uma vez que a maioria dos doentes desenvolvem resistência aos tratamentos e também apresentam efeitos secundários. Neste sentido, os aptameros surgiram como uma ferramenta promissora em sistemas de entrega de fármacos para terapias direcionadas ao CPNPC. Os aptameros são conhecidos como anticorpos químicos, uma vez que se podem ligar a proteínas com elevada especificidade. Além disso, têm várias vantagens sobre os anticorpos apresentando maior estabilidade e menor imunogenicidade. O AT11-L2 é um derivado do aptamero AS1411, formado por uma sequência rica em guaninas capaz de adotar uma estrutura G-quadruplex (G4) e tem como alvo a nucleolina (NCL), uma proteína sobre expressa na membrana celular das células cancerigenas nomeadamente em CPNPC. Assim, o objetivo deste estudo foi desenvolver dois sistemas lipídicos contendo doxorrubicina e BRACO-19 encapsulados e AT11-L2 na superfície. A estrutura do AT11-L2 foi primeiramente caracterizada por estudos biofísicos, e seguidamente a interação do aptamero com os ligandos foi estudada através de simulações de dinâmica molecular. O potencial dos ligandos para estabilizar o AT11-L2 foi também avaliado por diferentes estudos biofísicos. Seguidamente, os lipossomas foram sintetizados e caracterizados. Finalmente, a seletividade e a absorção celular dos lipossomas funcionalizados contendo os compostos em estudo foram determinadas em células de adenocarcinoma epitelial basal alveolar humano (A549) e em células de fibroblastos pulmonares fetais humanos (MRC-5). Os resultados mostraram que o AT11-L2 adopta uma estrutura G4 na presença de K+ e a sua estabilidade aumenta na presença do ligando de G4, PhenDC3, que interage com a estrutura de G4 do aptamero através de interacções de empilhamento p-p. Além disso, o complexo AT11-L2/NCL demonstrou ter uma elevada afinidade com um valor de KD da ordem do nanomolar. Os estudos in vitro mostraram que os lipossomas funcionalizados contendo BRACO-19 e doxorrubicina são seletivos e capazes de internalizar em células cancerígenas, tendo sido observada uma maior seletividade para os lipossomas com doxorrubicina. Estes resultados mostram o potencial terapêutico dos lipossomas funcionalizados com AT11-L2.
O cancro do pulmão (CP) é uma das doenças oncológicas com maior impacto na taxa de mortalidade em todo o mundo, particularmente o cancro do pulmão de não pequenas células (CPNPC). O tratamento do CPNPC depende do estadio da doença e pode envolver uma combinação de terapias, tais como cirurgia, quimioterapia, radioterapia ou imunoterapia. No entanto, algumas abordagens apresentam limitações, uma vez que a maioria dos doentes desenvolvem resistência aos tratamentos e também apresentam efeitos secundários. Neste sentido, os aptameros surgiram como uma ferramenta promissora em sistemas de entrega de fármacos para terapias direcionadas ao CPNPC. Os aptameros são conhecidos como anticorpos químicos, uma vez que se podem ligar a proteínas com elevada especificidade. Além disso, têm várias vantagens sobre os anticorpos apresentando maior estabilidade e menor imunogenicidade. O AT11-L2 é um derivado do aptamero AS1411, formado por uma sequência rica em guaninas capaz de adotar uma estrutura G-quadruplex (G4) e tem como alvo a nucleolina (NCL), uma proteína sobre expressa na membrana celular das células cancerigenas nomeadamente em CPNPC. Assim, o objetivo deste estudo foi desenvolver dois sistemas lipídicos contendo doxorrubicina e BRACO-19 encapsulados e AT11-L2 na superfície. A estrutura do AT11-L2 foi primeiramente caracterizada por estudos biofísicos, e seguidamente a interação do aptamero com os ligandos foi estudada através de simulações de dinâmica molecular. O potencial dos ligandos para estabilizar o AT11-L2 foi também avaliado por diferentes estudos biofísicos. Seguidamente, os lipossomas foram sintetizados e caracterizados. Finalmente, a seletividade e a absorção celular dos lipossomas funcionalizados contendo os compostos em estudo foram determinadas em células de adenocarcinoma epitelial basal alveolar humano (A549) e em células de fibroblastos pulmonares fetais humanos (MRC-5). Os resultados mostraram que o AT11-L2 adopta uma estrutura G4 na presença de K+ e a sua estabilidade aumenta na presença do ligando de G4, PhenDC3, que interage com a estrutura de G4 do aptamero através de interacções de empilhamento p-p. Além disso, o complexo AT11-L2/NCL demonstrou ter uma elevada afinidade com um valor de KD da ordem do nanomolar. Os estudos in vitro mostraram que os lipossomas funcionalizados contendo BRACO-19 e doxorrubicina são seletivos e capazes de internalizar em células cancerígenas, tendo sido observada uma maior seletividade para os lipossomas com doxorrubicina. Estes resultados mostram o potencial terapêutico dos lipossomas funcionalizados com AT11-L2.
Description
Keywords
Aptameros de G-Quadruplex Cancro do Pulmão de Não Pequenas Células Lipossomas Nucleolina