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Estudo do efeito das citocinas pró- inflamatórias IFN-? e IL-17A na ativação de linfócitos T humanos mediada pela IL-15
| datacite.subject.fos | Ciências Médicas::Ciências Biomédicas | por |
| dc.contributor.advisor | Arosa, Fernando Aguilar | |
| dc.contributor.advisor | Esgalhado, André João Gabriel | |
| dc.contributor.author | Duarte, Leila Regina Homem | |
| dc.date.accessioned | 2024-01-11T09:55:24Z | |
| dc.date.available | 2024-01-11T09:55:24Z | |
| dc.date.issued | 2023-11-02 | |
| dc.date.submitted | 2023-10-06 | |
| dc.description.abstract | As moléculas de MHC-I e MHC-II são proteínas membranares que funcionam como recetores que ligam e apresentam antigénios peptídicos a populações de linfócitos T CD8+ e TCD4+, respetivamente, através do recetor clonotípico dos linfócitos T presente na membrana plasmática dos mesmos. A apresentação antigénica entre as moléculas de MHC e os linfócitos T induz a ativação do sistema imunológico contra agressões internas e externas que causam um desequilíbrio da homeostasia tecidual, gerando uma resposta imunológica capaz de repor o microambiente. Sabe-se que as moléculas de MHC-I também apresentam a capacidade de gerar funções não-imunológicas, através de mudanças conformacionais na sua estrutura molecular causadas por uma atividade metabólica aumentada. A mudança de uma conformação fechada (molécula clássica de MHC-I) para uma conformação aberta (molécula não clássica de MHC-I) dá-se pela dissociação da cadeia leve ß2-microglobulina e/ou o péptido da cadeia pesada transmembranar e pode, portanto, ser crucial para o desenvolvimento de possíveis terapias celulares pela interação cis e trans com recetores dos linfócitos NK e dos linfócitos T. Esta interação cis-trans conduz à ativação destes linfócitos e consecutivamente concebe uma minimização ou um aumento das respostas imunológicas de modo a restabelecer a homeostasia dos tecidos. Considerando o efeito proliferativo conhecido da citocina homeostática IL-15 e o seu efeito na diferenciação de linfócitos T CD8+ em linfócitos T CD8+ de memória, pode-se propor que esta citocina possui a capacidade de ativar estes linfócitos e induzir funções não-imunológicas mediante a expressão de recetores de linfócitos NK e sua interação com moléculas de MHC-I abertas. Adicionalmente, é conhecido que as citocinas pró-inflamatórias IFN-? e IL-17A apresentam também potentes efeitos na ativação, proliferação e maturação de linfócitos T, pelo que se julgou que as mesmas poderiam sinergicamente ser cruciais na exacerbação do efeito já conhecido da IL-15 e que poderiam proporcionar um impacto significativo nas moléculas de MHC-I abertas para a geração de respostas não-imunológicas, focando-se, assim, o presente estudo. Para o estudo do efeito das citocinas IFN-? e IL-17A na ativação de linfócitos T humanos mediada pela IL-15, isolaram-se células mononucleares do sangue periférico de buffy-coats de dadores saudáveis e, por sua vez, isolaram-se a partir destes, linfócitos do sangue periférico humano. Estes foram seguidamente marcados com CFSE e cultivados durante 12 dias na presença de IL-15 e na ausência e presença de IFN-? e de IL-17A. Após os 12 dias de cultura celular, os PBLs marcados com CFSE foram marcados com os anticorpos primários W6/32 e HC-10, conjugados com o anticorpo secundário GAM PE e marcados com os anticorpos anti-CD3 (CD3 APC) e anti-CD8 (CD8 PercCP-Cy5.5 ou CD8ß PE Cy.7). Por fim, procedeu-se à sua análise por citometria de fluxo usando características de forward scatter/side scatter e realizou-se a análise estatística perante os resultados obtidos. Os nossos resultados permitiram compreender o potencial da sinergia das citocinas utilizadas em estudo na ativação e expansão de linfócitos T CD4+ e T CD8+ e na consequente expressão de moléculas de MHC-I fechadas e abertas, pelo que se pode constatar que a adição de IL-15 + IFN-? e de IL-15 + IL-17A induziu ao aumento da expressão de moléculas de MHC-I fechadas e à diminuição da expressão de moléculas de MHC-I abertas em linfócitos T CD4+ e T CD8+. Tais resultados permitiram, por fim, constatar que o efeito induzido pela IL-15 é parcialmente neutralizado pelas citocinas pró-inflamatórias IFN-? e IL-17A, o que pode estar relacionado com a competição pela ligação entre moléculas de CD8 e epitopos de HC-10 na membrana plasmática dos linfócitos T. | por |
| dc.description.abstract | MHC-I and MHC-II molecules are membrane proteins that function as receptors binding and presenting peptide antigens to populations of CD8+ and CD4+ T lymphocytes, respectively, through the clonotypic receptor of T lymphocytes, present on their plasma membrane. The antigen presentation between MHC molecules and T lymphocytes induces the activation of the immunological system against internal and external aggressions causing an imbalance of tissue homeostasis, generating an immune response capable of restoring the microenvironment. It is known that MHC-I molecules are also capable of nonimmunological functions through conformational changes in their molecular structure caused by an increased metabolic activity. The change from a closed conformation (classical MHC-I molecule) to an open conformation (non-classical MHC-I molecule) occurs because of the dissociation of the light ß2-microglobulin chain and/or the peptide of the heavy transmembrane chain, and can therefore be crucial for the development of possible cell therapies by cis and trans interaction with receptors for NK and T lymphocytes. This cistrans interaction leads to the activation of these lymphocytes, consequently resulting in a decrease or increase of the immune responses in order to restore tissue homeostasis. Considering the known proliferative effect of the IL-15 homeostatic cytokine and its effect on the differentiation of CD8+ T lymphocytes into CD8+ memory T lymphocytes, it can be proposed that this cytokine has the ability to activate these lymphocytes and induce nonimmunological functions, depending on the expression of NK lymphocyte receptors and their interaction with open MHC-I molecules. Additionally, it is known that the proinflammatory cytokines IFN-? and IL-17A also have significant effects on the activation, proliferation and maturation of T lymphocytes, meaning that they could synergistically be crucial in exacerbating the already known effect of IL-15, and they could provide a significant impact on open MHC-I molecules, resulting in the generation of nonimmunological responses. To study the effect of the IFN-? and IL-17A cytokines on the activation of human T lymphocytes mediated by IL-15, peripheral blood mononuclear cells were isolated from buffy-coats from healthy donors. Next, peripheral blood lymphocytes were isolated. These were then labelled with CFSE and cultured for 12 days in the presence of IL-15 and in the absence and presence of IFN-? and IL-17A. After 12 days of cell culture, CFSE-labelled PBL were once again labelled, this time with the primary antibodies W6/32 and HC-10 conjugated with the secondary antibody GAM PE, and with anti-CD3 (CD3 APC) and antiCD8 (CD8 PercCP-Cy5.5 or CD8ß PE Cy.7) antibodies. At last, cells were analysed by flow cytometry using forward scatter/side scatter characteristics, and statistical analysis was conducted on the obtained results. Our results allowed us to understand the potential synergy of the cytokines used in the study, in the activation and expansion of CD4+ and CD8+ T lymphocytes, and in the consequent expression of closed and open MHC-I molecules. It can be stated that the addition of IL-15 + IFN-? and IL-15 + IL-17A induced an increase in the expression of closed MHC-I molecules and a decrease in the expression of open MHC-I molecules, in CD4+ and CD8+ T lymphocytes. These results allowed us to verify that the effect induced by IL-15 is partially neutralised by the pro-inflammatory cytokines IFN-? and IL-17A, which could be related to a certain competition for the binding between molecules of CD8 and HC-10 epitopes on the plasma membrane of T lymphocytes. | eng |
| dc.identifier.tid | 203454057 | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.6/13903 | |
| dc.language.iso | por | por |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ | |
| dc.subject | Ativação e Proliferação de Linfócitos T | por |
| dc.subject | Ifn-? | por |
| dc.subject | Il-15 | por |
| dc.subject | Il-17a | por |
| dc.subject | Linfócitos T Cd4+ e T Cd8+ Humanos | por |
| dc.subject | Moléculas de Mhc-I Abertas e Fechadas | por |
| dc.title | Estudo do efeito das citocinas pró- inflamatórias IFN-? e IL-17A na ativação de linfócitos T humanos mediada pela IL-15 | por |
| dc.type | master thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| rcaap.rights | openAccess | por |
| rcaap.type | masterThesis | por |
| thesis.degree.name | 2º Ciclo em Ciências Biomédicas | por |
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