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Authors
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Abstract(s)
MHC Class I molecules are transmembrane glycoproteins composed by a 44-49 kDa heavy chain, a 12 kDa light chain named ß2-microglobulin and a 9-11 amino acid peptide. These molecules present peptides originating manly from intracellular peptides to cytotoxic T cells and are mandatory for the induction and development of adaptive immune responses. MHC Class I molecules are expressed by all nucleated cells. However, these molecules can be expressed in a different conformation, where MHC class I heavy chains are not associated with peptide and/or ß2-microglobulin (called open conformers) that can associate with a variety of cells surface receptors, resulting in modulation of their activation. Previous studies showed that open conformers are expressed at the cell surface of proliferating lymphoid cells.
In this work, we isolated peripheral blood mononuclear cells, from blood samples of healthy patients and iron overload and erythrocytosis patients, lysed red blood cells, labeled cells with CFSE, added different stimulus and cultured the cells for 6 days. After this period of time cells were labeled with different antibodies and analyzed by flow cytometry. Whole blood cells from Polycythemia Vera patients were isolated from 3 mL blood samples, red blood cells were lysed and cells were labelled with W6/32 and HC-10 antibodies.
Our results clearly demonstrate that the stimulus applied to the cells resulted in different proliferation rates and that in dividing T cells there’s a tendency for the maintenance or a slightly decrease in the expression of closed MHC Class I molecules and an increase in the expression of open conformers, for both CD4+ and CD8+ T lymphocytes. Regarding, Polycythemia Vera patients, expression of closed MHC class I molecules is increased, while the levels of open conformers expression are increased in monocytes and granulocytes.
As moléculas do Complexo Major de Histocompatibilidade (MHC) Classe I são glicoproteínas transmembranares compostas por uma cadeia pesada de 44-49 kDa, uma cadeia leve de 12 kDa denominada ß2-microglobulina e um péptido de 9-11 aminoácidos. Estas moléculas apresentam péptidos que são principalmente originados de péptidos intracelulares a células T citotóxicas e são necessárias para a indução e desenvolvimento de respostas imunes adaptativas. As moléculas de MHC Classe I são expressas por todas as células nucleadas. Contudo, estas moléculas podem ser expressas numa conformação diferente, na qual as cadeias pesadas de MHC classe I não se encontram associadas com o péptido e/ou com a ß2-microglobulina (denominados conformações abertas) que se podem associar com uma grande variedade de recetores expressos à superfície celular como por exemplo, o recetor de insulina, recetores de células Natural Killer (NK) e recetores de CD8, entre outros, modulando assim a sua ativação. Estas são também capazes de associar entre elas com implicações em doenças como a espondiloartrite. Estudos anteriores mostraram que estas conformações abertas são expressas na superfície celular de linfócitos ativados. Neste trabalho, as células mononucleares do sangue periférico foram isoladas de amostras de sangue de pessoas saudáveis e de pacientes com excesso de ferro e eritrocitose, os glóbulos vermelhos lisados, as células marcada com CFSE, tendo-se adicionado diferentes estímulos capazes de induzir divisão celular e colocaram-se as células em cultura durante 6 dias. Depois deste período, as células foram marcadas como diferentes anticorpos e analisadas por citometria de fluxo. Células do sangue total de pacientes com Policitemia Vera foram isoladas de amostras de sangue de 3 mL. Esta doença carateriza-se por elevado número de glóbulos vermelhos, aumento o volume do sangue, tornando-o assim mais espesso, sendo que este excesso de glóbulos vermelhos pode levar a outras complicações. Os glóbulos vermelhos foram lisados, as células lavadas e marcadas com os anticorpos W6/32 e HC-10. As amostras foram analisadas por citometria de fluxo. Os nossos resultados mostram claramente que os estímulos aplicados nas células resultaram em diferentes níveis de proliferação e que em linfócitos T em divisão existe uma tendência para a manutenção ou um ligeiro decréscimo na expressão de moléculas MHC classe I na sua conformação fechada, ao passo que as conformação abertas aumento, tendo isto sido verificado tanto para linfócitos T CD4+ como para linfócitos T CD8+. No caso dos doentes de Policitemia Vera, os resultados mostram que a expressão de moléculas MHC classe I na sua conformação fechada encontra-se aumenta nas três diferentes populações leucocitárias estudadas: linfócitos, monócitos e granulócitos. Em relação à expressão de moléculas MHC classe I na sua conformação aberta, a sua expressão encontrava-se aumenta nos monócitos e granulócitos ao passo que no caso dos linfócitos se encontrava diminuída em relação aos controlos. Os resultados obtidos neste estudo indicam que a proliferação e divisão de células T conduz a uma alteração na expressão de moléculas MHC classe I à superfície das células, resultando numa alteração que aparenta estar a levar a um equilíbrio entre as conformações fechadas e abertas, o que poderá ter várias implicações imunes e não-imunes, tendo em conta o tipo de associações a que as conformações abertas têm sido implicadas. Ainda assim, mais investigações são necessárias, sendo que existe a necessidade de aumentar o número de indivíduos estudados. O alargamento do tempo de cultura das células poderá levar a um melhor conhecimento sobre os mecanismos de expressão destas moléculas, visto que o número de divisões será maior, o que poderá mostrar qual a verdadeira tendência associada à expressão destas conformações de moléculas MHC classe I. No caso do estudo da expressão destas moléculas em pacientes com Policitemia Vera será necessário aumentar o número de controlos saudáveis, com uma idade superior a 65 anos, assim como monitorizar os doentes de modo a perceber possíveis alterações que estejam a ocorrer, visto que os dados apresentados correspondem apenas a resultados preliminares.
As moléculas do Complexo Major de Histocompatibilidade (MHC) Classe I são glicoproteínas transmembranares compostas por uma cadeia pesada de 44-49 kDa, uma cadeia leve de 12 kDa denominada ß2-microglobulina e um péptido de 9-11 aminoácidos. Estas moléculas apresentam péptidos que são principalmente originados de péptidos intracelulares a células T citotóxicas e são necessárias para a indução e desenvolvimento de respostas imunes adaptativas. As moléculas de MHC Classe I são expressas por todas as células nucleadas. Contudo, estas moléculas podem ser expressas numa conformação diferente, na qual as cadeias pesadas de MHC classe I não se encontram associadas com o péptido e/ou com a ß2-microglobulina (denominados conformações abertas) que se podem associar com uma grande variedade de recetores expressos à superfície celular como por exemplo, o recetor de insulina, recetores de células Natural Killer (NK) e recetores de CD8, entre outros, modulando assim a sua ativação. Estas são também capazes de associar entre elas com implicações em doenças como a espondiloartrite. Estudos anteriores mostraram que estas conformações abertas são expressas na superfície celular de linfócitos ativados. Neste trabalho, as células mononucleares do sangue periférico foram isoladas de amostras de sangue de pessoas saudáveis e de pacientes com excesso de ferro e eritrocitose, os glóbulos vermelhos lisados, as células marcada com CFSE, tendo-se adicionado diferentes estímulos capazes de induzir divisão celular e colocaram-se as células em cultura durante 6 dias. Depois deste período, as células foram marcadas como diferentes anticorpos e analisadas por citometria de fluxo. Células do sangue total de pacientes com Policitemia Vera foram isoladas de amostras de sangue de 3 mL. Esta doença carateriza-se por elevado número de glóbulos vermelhos, aumento o volume do sangue, tornando-o assim mais espesso, sendo que este excesso de glóbulos vermelhos pode levar a outras complicações. Os glóbulos vermelhos foram lisados, as células lavadas e marcadas com os anticorpos W6/32 e HC-10. As amostras foram analisadas por citometria de fluxo. Os nossos resultados mostram claramente que os estímulos aplicados nas células resultaram em diferentes níveis de proliferação e que em linfócitos T em divisão existe uma tendência para a manutenção ou um ligeiro decréscimo na expressão de moléculas MHC classe I na sua conformação fechada, ao passo que as conformação abertas aumento, tendo isto sido verificado tanto para linfócitos T CD4+ como para linfócitos T CD8+. No caso dos doentes de Policitemia Vera, os resultados mostram que a expressão de moléculas MHC classe I na sua conformação fechada encontra-se aumenta nas três diferentes populações leucocitárias estudadas: linfócitos, monócitos e granulócitos. Em relação à expressão de moléculas MHC classe I na sua conformação aberta, a sua expressão encontrava-se aumenta nos monócitos e granulócitos ao passo que no caso dos linfócitos se encontrava diminuída em relação aos controlos. Os resultados obtidos neste estudo indicam que a proliferação e divisão de células T conduz a uma alteração na expressão de moléculas MHC classe I à superfície das células, resultando numa alteração que aparenta estar a levar a um equilíbrio entre as conformações fechadas e abertas, o que poderá ter várias implicações imunes e não-imunes, tendo em conta o tipo de associações a que as conformações abertas têm sido implicadas. Ainda assim, mais investigações são necessárias, sendo que existe a necessidade de aumentar o número de indivíduos estudados. O alargamento do tempo de cultura das células poderá levar a um melhor conhecimento sobre os mecanismos de expressão destas moléculas, visto que o número de divisões será maior, o que poderá mostrar qual a verdadeira tendência associada à expressão destas conformações de moléculas MHC classe I. No caso do estudo da expressão destas moléculas em pacientes com Policitemia Vera será necessário aumentar o número de controlos saudáveis, com uma idade superior a 65 anos, assim como monitorizar os doentes de modo a perceber possíveis alterações que estejam a ocorrer, visto que os dados apresentados correspondem apenas a resultados preliminares.
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Conformações Abertas Linfócitos T Em Divisão Moléculas Mhc Classe I Policitemia Vera