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- Comparação da Campimetria SWAP e Campimetria convencional na Deteção, Análise e Seguimento do GlaucomaPublication . Gomes, Isabel Maria Costa Rebelo; Monteiro, Pedro Miguel LourençoO glaucoma é uma patologia em que há destruição das células ganglionares da retina, resultando na perda irreversível de campo visual. O diagnóstico precoce é fundamental para iniciar o tratamento e evitar os danos. A campimetria convencional acromática é a técnica de campimetria mais usada para detetar o glaucoma, mas devido à redundância do sistema visual, não deteta a perda de campo visual antes da destruição de elevado número de células ganglionares. A campimetria computadorizada de comprimento de onda curto é uma técnica em que são utilizados um fundo amarelo de luminosidade intensa e um estímulo azul de grande diâmetro, para ativar preferencialmente os cones sensíveis ao comprimento de onda curto suprimindo simultaneamente a atividade dos outros fotorrecetores, para isolar e medir a sensibilidade do sistema visual coniocelular, que tem reduzida redundância. Têm sido publicados muitos estudos comparativos para determinar qual é o melhor teste de campimetria para detetar o glaucoma. Nestes estudos foram obtidos diferentes resultados e conclusões. Nesta dissertação são revistos aspetos do sistema visual relacionados com a visão das cores e com o glaucoma, analisadas as técnicas de campimetria convencional e de campimetria computadorizada de comprimento de onda curto, estudados fatores que influenciam os resultados de exames campimétricos, e descritos estudos de comparação da campimetria convencional e da campimetria computadorizada de comprimento de onda curto na deteção análise e seguimento do glaucoma.
- Aplicação de dried blood spots na deteção e quantificação de canabinóides por cromatografia de gases/espectrometria de massas em tandemPublication . Caetano, Mariana Nogueira; Alba, Maria Eugénia GallardoA canábis é a droga ilícita mais comum e mais consumida mundialmente, como tal, é importante contribuir para o desenvolvimento de metodologias que tornem os laboratórios mais eficazes na identificação e quantificação desta substância psicoativa. O objetivo deste trabalho de investigação foi o desenvolvimento e validação de um método analítico por cromatografia de gases associada à espectrometria de massas em tandem (GS/MS-MS) e Dried Blood Spots (BDS) para a determinação e quantificação de delta-9-tetrahidrocanabinol, 11-hidroxi-delta-9-tetrahidrocanabinol e 11-nor-9-carboxi-delta-9-tetrahidrocanabinol em amostras de sangue. É de salientar que é a primeira vez que estes compostos são determinados por DBS e GS/MS-MS. Os fatores que podiam influenciar o processo de extração foram avaliados: tipo de solvente de extração (metanol, acetonitrilo, diclorometano, 2-propanol, hexano e acetato de etilo), volume de solvente de extração (2 a 5 mL), tempo de extração (10 a 60 min), tempo de centrifugação (10 a 30 min) e tempo de secagem da mancha de sangue (3h a overnight). As condições finais são as seguintes: aplicar 100 µL de sangue em cartões Whatman® Human ID Bloodstain Card e deixar secar durante 6h; após este tempo, a mancha que contém a amostra é retirada do cartão e são adicionados 4 mL de metanol. O processo de extração é efetuado sob agitação durante 40 min. Finalizado este tempo procede-se à remoção do cartão. A amostra é centrifugada durante 20 min a 3000 rpm, e o sobrenadante evaporado e derivatizado com MSTFA/TMCS num micro-ondas a 800W durante 2 min. O método foi validado seguindo critérios internacionalmente aceites e os parâmetros estudados incluíram linearidade, seletividade, limites de deteção (LOD) e quantificação (LLOQ), precisão e exatidão. A seletividade foi avaliada e não foram observadas interferências procedentes de substâncias endógenas ou de outras drogas eventualmente presentes nos diferentes tempos de retenção e iões dos analitos em estudo. O procedimento foi linear para o intervalo de concentrações de 1 até 30 ng/mL, com coeficientes de determinação superiores a 0,99 para todos os analitos. As precisões intra- e inter-dia foram tipicamente inferiores a 15% para todos os analitos. Os LODs foram de 1 ng/mL para todos os compostos e as recuperações variaram entre 14% e 88%. O método validado mostrou ser aplicável à análise de amostras reais, sendo então uma ferramenta vantajosa não só no âmbito de análises de toxicologia clínica e forense, mas também em análises de despistagem de consumo de canábis.
- A oxidação de esteroides pregnanos na preparação de potenciais compostos quimioterápicosPublication . Agostinho, Raquel Maria Rodrigues; Silvestre, Samuel Martinspresente documento contempla um Relatório de Estágio em Farmácia Comunitária, um Relatório de Estágio em Farmácia Hospitalar e um trabalho de investigação laboratorial intitulado “A oxidação de esteroides pregnanos na preparação de potenciais compostos quimioterápicos”. O primeiro capítulo corresponde ao trabalho de investigação laboratorial realizado no Centro de Investigação em Ciências da Saúde da Universidade da Beira Interior. Este trabalho consistiu em estudos de oxidação alílica de esteroides pregnanos e sua potencial aplicação. Para isso, partiu-se de três substratos diferentes - acetato de pregnenolona, acetato de 16-desidropregnenolona e progesterona. Verificou-se, no entanto, que, no caso do acetato de 16-desidropregnenolona, acontecia não só uma oxidação alílica como também uma epoxidação. Foram também realizados estudos mecanísticos com dois inibidores radicalares diferentes, que permitiram inferir acerca do mecanismo radicalar de oxidação alílica. Por fim, fez-se uma avaliação da citotoxicidade de dois dos compostos sintetizados em duas linhas celulares de tumores prostáticos (LNCaP e PC-3) diferentes, com o objetivo de averiguar o potencial quimioterápico destes, verificando-se que os compostos têm potencial para progredir para estudos futuros neste âmbito. O Estágio Curricular em Farmácia Comunitária que realizei na Farmácia Parente, na Covilhã, teve a duração de 3 meses. A descrição desta experiência profissionalizante, que inclui tanto os termos legais como os termos científicos em que se processa esta atividade, encontra-se no segundo capítulo da presente dissertação, correspondente ao Relatório de Estágio em Farmácia Comunitária. No terceiro capítulo encontra-se o Relatório de Estágio em Farmácia Hospitalar. Este Estágio Curricular foi realizado em Florença, Itália, na Azienda Ospedaliero-Universitaria Careggi, ao abrigo do Programa Erasmus+. Teve a duração de 3 meses. Neste capítulo é feita uma descrição das atividades profissionais que o farmacêutico hospitalar desempenha de acordo com as Boas Práticas da Farmácia Hospitalar e a legislação em vigor.
- Avaliação da sustentabilidade da indústria automóvel do Reino Unido com base em relatórios de sustentabilidadePublication . Barros, Miguel Martins de; Azevedo, Susana Maria Palavra Garrido; Matias, João Carlos de OliveiraHoje em dia, o desenvolvimento sustentável é visto como algo prioritário para as empresas que reconhecem o impacto que este tem nos seus negócios, representando uma nova fonte de vantagem competitiva, um mecanismo para a gestão da qualidade que inclui elementos sociais, ambientais e económicos. A necessidade para avaliar e quantificar o desenvolvimento sustentável, não apenas das empresas, mas também das cadeias de abastecimento (supply chains) adjacentes, suscita a procura e investigação de novas ferramentas e metodologias mais adequadas a esta unidade de análise. Neste contexto, foi elaborada a presente dissertação que tem como principal objetivo a avaliação do nível de sustentabilidade da cadeia de abastecimento da indústria automóvel do Reino Unido. Para isso, foi proposto um novo índice agregado que considera simultaneamente as três dimensões da sustentabilidade (económica, ambiental e social). Posteriormente, de forma a atingir essa avaliação, o índice é aplicado a um caso de estudo, tendo sido examinados 25 relatórios de sustentabilidade relativos ao período compreendido entre 1999 e 2014.
- Prevalência da sensibilização alérgica em alunos universitários - estudo pilotoPublication . Nunes, Igor Cordeiro Bordalo; Lourenço, Olga Maria MarquesA presente dissertação é composta de três partes distintas. A primeira parte é o resultado de um trabalho de investigação para avaliar a exequibilidade de um protocolo para um estudo cohort da sensibilização alérgica numa população de estudantes universitários. A segunda e terceira partes consistem nos meus relatórios de estágio em farmácia comunitária e farmácia hospitalar, respetivamente. Parte I Objetivo. Avaliar a exequibilidade de um estudo cohort na Universidade da Beira Interior para avaliar a incidência de novos casos de sensibilização alérgica em novos alunos desta instituição de ensino superior. Introdução. A sensibilização alérgica é um mecanismo imunológico desencadeado em resposta a estímulos externos, ou seja, alergénios. Estes são proteínas com propriedades pró-alergénicas ou homólogas. O processo imunológico envolve várias células do sistema imunitário — células Th2, B, mastócitos, eosinófilos — e citocinas por si produzidas (nomeadamente interleucinas (IL)) as quais, por mecanismos ainda em estudo, podem levar ao desenvolvimento de doenças alérgicas específicas, tais como rinite alérgica e asma. Estas têm um impacto negativo não só na vida dos doentes como também da sociedade em geral. Alguns fatores têm influência nos mecanismos da sensibilização alérgica, incluindo geoclimáticos. Consoante o clima e a geografia, a prevalência de alergénios específicos varia, pelo que se pode colocar a hipótese da sensibilização em cada indivíduo também poder variar com a mudança de habitação. Materiais e métodos. A amostra do estudo-piloto consistiu em estudantes voluntários dos cursos de Ciências da Saúde com a sua primeira matrícula na Universidade da Beira Interior. Aos voluntários foi aplicado um questionário standardizado do ISAAC, adaptado ao projeto, e foram realizados testes cutâneos aos que os aceitaram realizar segundo a técnica adaptada de Jack Pepys e standardizada a nível europeu, recorrendo a uma bateria de aeroalergénios adaptada da recomendada pelo estudo GA²LEN. As respostas ao questionários foram validadas manualmente para análise dos principais erros cometidos e o protocolo foi submetido a uma análise SWOT. Com base nos resultados dos testes cutâneos, foi calculada a amostra mínima necessária para um estudo tendo em conta a prevalência calculada. Resultados. De uma população de 330 alunos, a taxa de resposta foi de 54;85% (n = 181). 71;27% dos voluntários aceitou realizar os testes cutâneos, tendo apenas comparecido 52;21% destes. A taxa de respostas inválidas ao questionário foi de 19;33%, a qual baixou para 14;92% após correção por parte dos voluntários, promovida e orientada pelos investigadores. A parte relativa à rinite alérgica e rinoconjuntivite constituiu 69;44% dos erros. A prevalência de sensibilização alérgica a pelo menos um dos aeroalergénios testados foi de 66;15%, onde os ácaros do pó doméstico (D. pteronyssinus e D.farinae) e Poa pratensis foram os alergénios com sensibilização mais prevalente. Para uma população de 330 alunos, a amostra mínima necessária é de 169 voluntários. Conclusão. Não foi possível reunir um número de respostas válidas suficiente ao questionário a fim de realizar uma análise estatisticamente significativa (nível de confiança: 95%; intervalo de confiança: 5%) nem estabelecer as causas para o fornecimento de respostas inválidas uma vez que o questionário proposto pelo ISAAC foi utilizado com sucesso noutros estudos de prevalência de doenças alérgicas. A taxa de resposta foi insuficiente e a taxa de não-comparência nos testes cutâneos foi elevada. Parte II O farmacêutico comunitário representa a interface entre o doente e o bom uso dos medicamentos. O seu papel é, portanto, preponderante na saúde pública. Como parte da minha experiência profissionalizante, integrei a equipa da Farmácia São Cosme, situada na cidade da Covilhã, num estágio curricular de 488 horas onde tive a oportunidade de viver o dia-a-dia de uma farmácia comunitária e realizar atos farmacêuticos. O relatório de estágio percorre o circuito do medicamento, assim como aborda a gestão da farmácia e os atos farmacêuticos por mim levados a cabo, nomeadamente: atendimento ao público, dispensa de medicamentos, aconselhamento farmacêutico, prestação de serviços de saúde e preparação de medicamentos manipulados. Apesar de esta experiência profissionalizante ter fornecido uma boa visão acerca do papel do farmacêutico comunitário, esta não foi a que esperava uma vez que não me senti verdadeiramente parte da equipa. Parte III Ao providenciar um serviço de saúde pública, um hospital depende da sua farmácia para o fornecimento eficaz e eficiente de medicamentos aos vários serviços. Por conseguinte, o farmacêutico hospitalar tem um papel fulcral. Ao integrar a equipa dos Serviços Farmacêuticos do Centro Hospitalar da Cova da Beira, pude participar ativamente nos diversos setores que os constituem (tais como farmacotecnia, distribuição, ambulatório, ensaios clínicos). Esta experiência profissionalizante de 312 horas permitiu-me preparar bolsas de nutrição parentérica, medicação citotóxica, medicamentos manipulados, assim como participar na reembalagem, distribuição em dose unitário, dispensa em regime de ambulatório, análise farmacocinética, entre outros atos farmacêuticos. Tendo-me sentido parte da equipa, esta experiência foi vital na minha formação profissional enquanto farmacêutico.
- Highly selective capture of minicircle DNA biopharmaceuticals by a novel zinc-histidine peptide conjugatePublication . Gaspar, Vítor Manuel Abreu; Cruz, Carla Patrícia Alves Freire Madeira; Queiroz, João; Pichon, Chantal; Correia, Ilídio; Sousa, FaniThe use of minicircle DNA (mcDNA) biomolecules as a pharmaceutical product holds remarkable potential due to their improved therapeutic efficacy in comparison with standard non-viral gene expression vectors. However, mcDNA translation into clinical application is still highly restricted due to the lack of robust technologies for minicircles detection and purification. In this study, the potential of a zinc-binding histidine-based peptide to function as a novel ligand for mcDNA recovery was investigated by using high-throughput surface plasmon resonance (SPR) analysis. The histidine-based peptide successfully bound zinc cationic ions and had affinity towards mcDNA biomolecules as confirmed by the dynamic binding responses obtained in SPR experiments. Notably, the obtained results indicate that not only zinc-peptide ligands are able to bind mcDNA with very high affinity (KD = 4.21 × 10−10 M), but also that this interaction is mostly dependent on buffer type. In general, the findings indicated that Zn2+ bound peptide has high affinity to mcDNA in low ionic strength buffers, whereas with high salt buffers no binding is detected. Overall, the novel zinc-binding peptide has shown to have suitable properties for mcDNA binding and recovery under experimental conditions that assure genetic material stability. More importantly, the straightforward approach of employing simple biomimetic ligands for mcDNA capture will contribute for development of new technologies to purify DNA biopharmaceuticals.
- A bag of words description scheme for image quality assessmentPublication . Fernandes, Miguel Francisco Fidalgo; Pinheiro, António Manuel GonçalvesEvery day millions of images are obtained, processed, compressed, saved, transmitted and reproduced. All these operations can cause distortions that affect their quality. The quality of these images should be measured subjectively. However, that brings the disadvantage of achieving a considerable number of tests with individuals requested to provide a statistical analysis of an image’s perceptual quality. Several objective metrics have been developed, that try to model the human perception of quality. However, in most applications the representation of human quality perception given by these metrics is far from the desired representation. Therefore, this work proposes the usage of machine learning models that allow for a better approximation. In this work, definitions for image and quality are given and some of the difficulties of the study of image quality are mentioned. Moreover, three metrics are initially explained. One uses the image’s original quality has a reference (SSIM) while the other two are no reference (BRISQUE and QAC). A comparison is made, showing a large discrepancy of values between the two kinds of metrics. The database that is used for the tests is TID2013. This database was chosen due to its dimension and by the fact of considering a large number of distortions. A study of each type of distortion in this database is made. Furthermore, some concepts of machine learning are introduced along with algorithms relevant in the context of this dissertation, notably, K-means, KNN and SVM. Description aggregator algorithms like “bag of words” and “fisher-vectors” are also mentioned. This dissertation studies a new model that combines machine learning and a quality metric for quality estimation. This model is based on the division of images in cells, where a specific metric is computed. With this division, it is possible to obtain local quality descriptors that will be aggregated using “bag of words”. A SVM with an RBF kernel is trained and tested on the same database and the results of the model are evaluated using cross-validation. The results are analysed using Pearson, Spearman and Kendall correlations and the RMSE to evaluate the representation of the model when compared with the subjective results. The model improves the results of the metric that was used and shows a new path to apply machine learning for quality evaluation.
- Promoting Nigrostriatal Protection through the Intranasal Delivery of a GPER AgonistPublication . Pinto, Hernâni dos Santos; Baltazar, Graça Maria FernandesParkinson’s Disease (PD) is a neurodegenerative disorder characterized by progressive and preferential loss of dopaminergic neurons in the Substantia Nigra pars compacta (SNpc). Estrogens have been recognized by their potential to protect dopaminergic neurons in PD. However, important side effects have been associated with estrogens therapy, mainly due to the activation of estrogen receptors alpha and beta, which discourages its use. The activation of cell survival pathways, together with the anti-inflammatory effects triggered by G protein– coupled estrogen receptor (GPER) activation makes this receptor a promising target for PD therapeutics avoiding most of the important side effects of estrogen therapy. We found that selective activation of GPER with G-1 protects neurons against the dopaminergic toxin MPP+/MPTP. GPER is expressed broadly and functions for GPER have been described in almost every physiological system, including reproductive, endocrine, urinary, immune, musculoskeletal and cardiovascular. Taking into consideration that the putative use of this agonists as protective strategy should be as specific as possible and that G-1 is a lipophilic molecule that rapidly diffuses through tissues we propose to test the effectiveness of the intranasal administration of this compound. We compared the effectiveness of delivering G-1 by subcutaneous injection and by intranasal administration in protecting the nigrostriatal pathway from a lesion induced by stereotaxic injection of lipopolysaccharide (LPS) bilaterally in the Substantia Nigra (SN). Besides evaluation of the lesion extent by tyrosine hydroxylase (TH) immunohistochemistry and the inflammatory effect through analysis of the microglial marker ionized calcium binding adaptor molecule 1 (iba-1) and astrocyte marker glial fibrillary acidic protein (GFAP), we also determined the capability of the two forms of G-1 administration to promote functional recovery of motor impairments induced by LPS by analyzing the motor behaviour of the animals with the Rota Rod and the Open Field test. Our results showed that both intranasal and subcutaneous delivery of G1 were efficient in controlling microglial reactivity and astrocyte activation in the LPS mice model. Concerning the dopaminergic protection, the results were less clear since in the experimental conditions used the extent of the dopaminergic lesion was very small, being insufficient to induce motor impairments.