Browsing by Issue Date, starting with "2016-11-10"
Now showing 1 - 10 of 14
Results Per Page
Sort Options
- Falsas memórias no Paradigma DRMPublication . Costa, Daniela Inês Campos da; Simões, Maria de Fátima de JesusRecentemente a Psicologia, especificamente a Psicologia Cognitiva Experimental, tem revelado um aumento no interesse pelo conceito de falsas memórias e todo o esquema por detrás do mesmo. O conceito foi primeiramente detetado por Bartllet, acabando por ganhar uma emergência maior com os estudos de Deese, Roediger e McDermott, conceptualizando o paradigma DRM e delimitando a tradução de falsas memórias. É atualmente entendido como falsas memórias a capacidade de relembrar eventos que nunca ocorreram, ou relembrá-los de um modo ligeiramente diferente daquele que realmente aconteceu sendo que, o paradigma DRM se baseia na produção das mesmas. De modo a tentar alcançar uma compreensão mais completa de todo o processo inerente à formação das falsas memórias, criou-se um estudo através de uma amostra aleatória constituída por 30 estudantes universitários. Recriando o paradigma DRM com o programa E-Prime 2 Professional, obteve-se valores significativos de falsos reconhecimentos, mais precisamente as falsas memórias, numa percentagem de 56%. Tornou-se possível modificar variáveis do mesmo, especificamente o tipo de letra, com o objetivo de perceber a influência dessa alteração no aumento, ou não, da formação de falsas memórias, apontando percentagens mais elevadas no grupo de controlo contudo, sem diferenças estatisticamente significativas.
- Avaliação Química de Uma Planta Medicinal AngolanaPublication . Gonçalves, Cláudia Andrade Vieira; Mendonça, António José Geraldes de; Mendonça, Dina Isabel Malheiros Dinis deNeste trabalho foi estudada a Paropsia brazzeana Bail, uma planta medicinal angolana recolhida na Huila. O material vegetal foi macerado e extraído a frio com metanol. De seguida procedeuse ao processo de fracionamento do extrato bruto em fração de hexano/acetato de etilo 95:5, hexano/acetato de etilo 8:2, hexano/acetato de etilo 1:1, acetato de etilo, acetato de etilo/metanol 9:1, acetato de etilo/metanol 7:3, acetato de etilo/metanol 1:1, metanol e metanol/ácido clorídrico. Das frações obtidas com as misturas de vários solventes com polaridades crescentes, foram isolados quatros compostos. O geraniol foi isolado a partir da fração hexano/acetato de etilo 95:5, o ß-sitosterol e o ácido octanóico foram isolados a partir da fração hexano/acetato de etilo 1:1 e o ácido 14- nor-7,8-seco-10-oxocadinano-1(6),3-dienóico, que isolado a partir da fração acetato etilo, foi isolado pela primeira vez no género Paropsia e foi considerado um novo produto natural. Nas restantes frações não foi isolado nenhum composto. As frações hexano/acetato de etilo 95:5, hexano/acetato de etilo 8:2, hexano/acetato de etilo 1:1 e acetato de etilo foram utilizadas para testes de citotoxicidade nas células MCF-7 e NHDF. Para efetuar os ensaios de citotoxicidade fez-se o ensaio para determinar a viabilidade celular (MTT) e o ensaio de doseamento de proteínas (BCA). Os resultados dos ensaios de viabilidade celular e de doseamento de proteínas feitos nas MCF-7 mostraram que todas as frações testadas aparentemente são tóxicas para essas células. Os resultados dos ensaios feitos nas NHDF são semelhantes aos resultados obtidos nas MCF-7, tanto os ensaios da viabilidade celular como os resultados do doseamento de proteínas apontaram para uma possível toxicidade das frações para com as células.
- Necessidades psicológicas básicas e comportamento alimentar em crianças e adolescentesPublication . Albuquerque, Paula Peixoto; Ramos, Ludovina Maria de AlmeidaO mundo tem assistido a um aumento significativo das doenças cardiovasculares, cancro, diabetes e doenças respiratórias crónicas. Este aumento global, epidémico, destas doenças está estritamente relacionado com alterações dos estilos de vida, nomeadamente, alimentação não saudável, inatividade física (sedentarismo) e o tabagismo (DGS, 2011). Para Ryan, Patrick, Deci, & Williams (2008) estes estilos de vida envolvem comportamentos que são potencialmente controláveis pelo indivíduo. Alimentação é um fator muito importante para a saúde. A seleção e ingestão de alimentos, tal como o seu consumo rotineiro ou repetido, caracteriza o comportamento alimentar (Ramos & Stein, 2000; Viana, Santos & Guimarães, 2008). É de salientar que explorar temas como o comportamento alimentar é importante para a sociedade de hoje, que é obcecado pelo culto do corpo atraente e desejável (Veselá & GrebeNová, 2010) e por outro lado apresenta um crescimento notável do número de indivíduos com excesso de peso e obesidade (DGS, 2011). Então tendo em conta estas problemáticas achou-se pertinente realizar um estudo do comportamento alimentar associado às Necessidades Psicológicas Básicas conceituadas dentro da Teoria da Autodeterminação (TAD). No modelo da Teoria da Autodeterminação as pessoas são entendidas como tendo necessidades psicológicas básicas, subjacentes à motivação intrínseca, sendo estas a necessidade de autonomia, competência e relacionamento. A satisfação destas é essencial para um ótimo desenvolvimento e saúde mental. Os indivíduos que não conseguirem obter a satisfação dessas necessidades podem bloquear a sua consciência, ou minimizar o valor destes autonutrientes. (Guimarães & Boruchovitch, 2004; Ryan & Deci, 2008). Tendo em conta isso, pretende-se saber, com este estudo, se existe alguma relação entre as necessidades psicológicas básicas (autonomia, competência e relacionamento) e o comportamento alimentar (externo, restritivo e emocional). Palavras-chave: necessidades psicológicas básicas, autonomia, competência, relacionamento, satisfação, frustração, comportamento alimentar, estilo alimentar.
- Automatic Local Coordinates Evaluating and automating methods to estimating 3D coordinates with respect to a specific DatumPublication . Couto, Rafael Gonçalves; Fernandes, Rui Manuel da SilvaThe physical location of a specific point in the globe does not has the same coordinates as time passes by. This is due to the movement of the tectonic plates. The physical point, observed in a specific day, changes as function of time and consequently its precise coordinates change as well. However, for many geo-referencing applications (mapping, navigation, etc.) it is preferable to consider static reference frames such as the system currently in force in Portugal (PT-TM06 / ETRS). To obtain the coordinates of a point in relation to a static reference frame it is necessary: (1) processing the observation data, and (2) convert this data for the selected reference datum. For processing the observation data it is possible to use online GNSS data processing services. These are simple to use and provide this type of post-processing to groups with lower financial resources and / or specific expertise. However, these require converting the results of the online services from the used datum (usually the materialization of the last ITRF at the time of observation) to the desired reference datum. This is accomplished through the calculation and application of transformation parameters to the coordinates obtained in the online processing. This thesis presents in detail the implementation of a solution that aims to automate the entire process of calculating coordinates in a given datum reference (usually national) using online pro¬cessing services. The application to Portugal was used as case study, using the National Network of GNSS Permanent Stations (ReNEP), which is managed by the Direcção Geral do Território to materialize the reference datum. The focus of this work has been more focused on informatics component, however other studies were also conducted that allowed to the evaluation of the quality of the obtained coordinates and to define some of the parameters required to optimize these. To obtain the coordinates of the final system (for Portugal, the national materializa¬tion of ETRS89) it was necessary to develop several tools, which were subsequently tested and validated, and consist in: • Automatic GNSS data processing using online processing services; • Gross error detection (outliers) and formal error normalization given by online services; • Calculation and subsequent application of coordinate transformation parameters; • Development of a web service to be provided to the community. ln the developed tools there is still room for expansion (such as adding more online services) and improvement of some features (such as automatic integration with the MGN application (GNSS Networks Management) and automatic detection of errors in the reference stations). However, the objectives have been achieved and currently, the tool and the web service are available in operating mode (although not yet officially released), hosted in SEGAL servers ready to be tested by the community. It also planned to test the implementation of the ALC in other countries (eg. Mozambique, Bhutan).
- Estudo comparativo entre as avaliações subjetivas e objetivas da refração ocularPublication . Pina, Pedro Miguel dos Anjos; Fiadeiro, Paulo Torrão; Monteiro, Pedro Miguel LourençoEste trabalho foi realizado com o intuito de desenvolver um estudo comparativo entre a refração objetiva com a refração subjetiva. Para tal utilizou- se o autorefratómetro Nidek 310A e o autorefratómetro Unicos URK-800. A refração subjetiva foi efetuada monocularmente através de testes optométricos convencionais e as medições objetivas foram feitas através dos autorefratómetros já referidos. Participaram no estudo 107 sujeitos, sendo excluídos os sujeitos com quaisquer patologias oculares, historial de cirurgias ou qualquer trauma que afetasse a visão, e acuidade visual inferior a unidade. Na análise estatística os valores da refração são transformados em componentes vetoriais segundo a decomposição de Fourier. Com análise gráfica de Bland-Altman, comparam-se os valores da refração subjetiva com a refração objetiva e as diferenças entre os dois autorefratómetro. Para complementar análise dos dados, as componentes vectorias são convertidas para a forma convencional esférica-cilíndrica. Os resultados obtidos mostram uma maior exatidão dos dois aparelhos na parte cilíndrica, sendo o autorefratómetro Nidek AR-310A, mais fiável que o Únicos URK-800, embora as diferenças entre os dois autorefratómetros não fosse clinicamente significativa.
- Bioreconhecimento de DNA minicircular por derivados de aminoácidos imobilizados em suportes monolíticosPublication . Pais, Vânia Nascimento; Sousa, Fani Pereira de; Sousa, Ângela Maria Almeida deAtualmente existem diversas patologias que afetam a sociedade, cujas terapias disponíveis não são adequadas, vitimando uma parte da população. A terapia génica e as vacinas de DNA são uma alternativa promissora que visa a administração de DNA que permite que o organismo expresse dada proteína/informação necessária para o tratamento da doença. Os plasmídeos têm sido o meio de entrega do DNA não viral mais utilizados, contudo são constituídos por genes necessários para a produção e replicação nos respetivos hospedeiros que quando administrados em humanos podem causar respostas inflamatórias e imunitárias. Neste contexto, surge o DNA minicircular (mcDNA) como uma tecnologia altamente promissora visto que é constituído unicamente pelos genes de expressão eucariota, necessários para a expressão do gene terapêutico. O mcDNA é por isso considerado um vetor de DNA mais seguro e está associado a um elevado efeito terapêutico, sendo necessário o desenvolvimento de metodologias eficientes para a sua purificação. Neste projeto foi usada a cromatografia de afinidade com derivados de aminoácidos (agmatina e histamina) como ligandos, para estabelecer um método eficaz de purificação do mcDNA. Para o alcance dos melhores resultados possíveis quando aplicada cromatografia de afinidade é essencial um conhecimento minucioso do tipo de interações que se estabelecem entre a amostra injetada e os derivados de aminoácidos estudados. Neste estudo, verificou-se que para o caso da agmatina estabelecem-se maioritariamente interações eletrostáticas para valores de pH inferiores ao pKa e que estas são intensificadas com a diminuição do pH. Observou-se também uma preferência por parte do monolito para a isoforma sc provavelmente devido à maior exposição das bases que assim permite que se intensifiquem outras interações como interações catião-p e interações por pontes de hidrogénio entre as aminas da agmatina e preferencialmente as guaninas da isoforma sc do mcDNA. Relativamente à histamina, apesar de não se ter conseguido estabelecer uma estratégia de purificação, foi também estudado um possível bioreconhecimento do mcDNA para com este derivado de aminoácido. E observou-se que quando utilizado NaCl há também uma preferência por interações eletrostáticas quando aplicados valores de pH inferiores ao pKa, pois assim o ligando apresenta uma carga global positiva que, por conseguinte, interage fortemente com a carga negativa do DNA conferida pelos grupos fosfato. Relativamente à estratégia de eluição com recurso a sulfato de amónio não foi concretizável visto que não se conseguiu obter seletividade, no entanto esta estratégia é menos interessante do ponto de vista industrial dada a implicação ambiental negativa associada ao sulfato de amónio. Após o estudo das diversas condições definiu-se que o suporte mais promissor para a purificação do mcDNA era o monolito modificado com agmatina, usando como gradiente a estratégia por passos com as seguintes concentrações de NaCl: 0 M, 1,5 M, 2,25 M e 2,7 M em 10 mM de tampão Tris-HCl. A biomolécula de interesse eluiu a 2,7 M de NaCl, no entanto verificou-se uma grande perda desta nos passos anteriores. Contudo, neste tipo de estudo, por vezes é necessário comprometer a recuperação de modo a conseguir a pureza adequada. Desta forma, a estratégia desenvolvida neste trabalho permitiu uma separação eficaz da isoforma sc do mcDNA, embora se tenha comprometido parte da biomolécula de interesse nos passos iniciais. De uma forma sucinta, a utilização do suporte monolítico modificado com agmatina pode ser uma solução para a purificação da isoforma sc do mcDNA para uma posterior aplicação terapêutica.
- Genetic and epigenetic mechanisms involved in regulation of STEAP1 gene expression in LNCaP prostate cancer cellsPublication . Sousa, Inês Margarida Marques de; Batista, Cláudio Jorge Maia; Lemos, Manuel Carlos Loureiro deProstate cancer is the second most frequently diagnosed type of cancer and the fifth leading cause of cancer death in men worldwide. Prostate carcinogenesis is characterized by progressive alterations in genetic and epigenetic mechanisms that deregulate gene expression. The Six Transmembrane Epithelial Antigen of the Prostate 1 (STEAP1) gene encodes a protein with six transmembrane domains. In normal tissues, STEAP1 expression is very low but is overexpressed in several human cancers, mainly in prostate cancer. Some studies have indicated that STEAP1 overexpression seems to promote cell growth, suggesting that STEAP1 may act as an oncogene. Previous studies demonstrated that STEAP1 mRNA and protein have higher stability in LNCaP prostate cancer cell lines when compared with PNT1A non-neoplastic prostate cell lines, possibly due to post-transcriptional and post-translational modifications. However, these alterations do not justify the overexpression of STEAP1 in tumor cells, suggesting that other mechanisms may be involved. Therefore, the aim of this study was to explore the hypothesis that genetic and / or epigenetic alterations may be involved in overexpression of STEAP1. In order to evaluate genetic alterations in the STEAP1 gene sequence, the promoter region of STEAP1 in LNCaP and PNT1A cells was sequenced. To study the involvement of epigenetic mechanisms, the methylation patterns of STEAP1 in PNT1A and LNCaP cells were compared. In addition, the effect of treatment with DNA methyltransferases (DNMT) and histone deacetylases (HDAC) inhibitors on STEAP1 mRNA expression in PNT1A cells was evaluated. The sequence analysis of the promoter region of STEAP1 revealed some differences in both PNT1A and LNCaP cells when compared with the available genomic sequence. In silico analysis of the identified variants revealed several alterations in the transcription factors (TF) that can bind to each allelic variant including the binding of transcriptional activators to the altered allele of the variants. The analysis of the methylation pattern of STEAP1 gene in PNT1A and LNCaP cells showed differences in the promoter region near the transcription start site. The treatment with 5-Aza-2’-deoxycytidine (DNMT inhibitor) induced a slight increase in STEAP1 mRNA expression (3 fold-variation in comparison with control group, p<0.01) while the treatment with both 5-Aza-2’-deoxycytidine and TSA (HDAC inhibitor) induced a marked increase in STEAP1 mRNA expression (15 fold-variation relatively to control, p<0.001). The difference in the methylation pattern of STEAP1 between PNT1A and LNCaP cells, along with the increased STEAP1 mRNA expression in response to DNMT and HDAC inhibitors, indicates that STEAP1 gene expression seems to be regulated by epigenetic mechanisms.
- Klotho: um novo alvo terapêutico no tratamento da doença de Parkinson?Publication . Alexandre, Daniela de Jesus; Fonseca, Carla Sofia PaisO envelhecimento é o principal fator de risco para a doença de Parkinson, a segunda doença neurodegenerativa mais comum, caracterizada principalmente pela perda progressiva e seletiva dos neurónios dopaminérgicos da via nigroestriatal, resultando numa diminuição dos níveis de dopamina nesta região e consequentemente em sintomas motores. Vários são os mecanismos que desempenham um papel importante na perda neuronal, estando entre eles o stress oxidativo, que leva à formação de radicais livres, e os processos neuroinflamatórios. Um dos principais objetivos da investigação no âmbito da DP é o desenvolvimento de fármacos que retardem ou parem o processo neurodegenerativo. A Klotho é uma proteína supressora do envelhecimento e a sua sobre-expressão em ratos está associada a uma extensão do tempo de vida. Estudos anteriores mostraram que os níveis circulantes de Klotho diminuem com a idade e que existe uma forte correlação entre os níveis elevados da sua expressão e o estado saudável dos animais. Apesar das múltiplas funções atribuídas a esta proteína, o seu mecanismo de ação no cérebro não está completamente compreendido. Contudo, tem sido relatado que esta proteína melhora a plasticidade sináptica, as funções cognitivas e, para além disso, pode influenciar uma variedade de estruturas e funções do sistema nervoso central durante a maturação e o envelhecimento. Esta proteína é altamente expressa no cérebro, principalmente no plexo coróide e nos neurónios. Estudos recentes têm atribuído à Klotho um papel importante na neuroprotecção. Menores concentrações de Klotho foram detetadas no líquido cefalorraquidiano de doentes de Alzheimer, quando comparado com indivíduos saudáveis da mesma idade. Esta proteína aumenta a resistência ao stress oxidativo por ativação de algumas vias de sinalização e, quando adicionada exogenamente in vitro, protege os neurónios do hipocampo da excitotoxicidade induzida pelo glutamato, através do sistema Trx/Prx, tendo sido proposta como um novo alvo terapêutico para a doença de Alzheimer. No que diz respeito à doença de Parkinson, sabe-se apenas que em murganhos mutantes para o gene da Klotho existe uma diminuição no número de neurónios dopaminérgicos na substantia nigra e nos níveis de dopamina no estriado, e que animais transgénicos para a Klotho (que sobre-expressam esta proteína) são menos vulneráveis ao stress oxidativo induzido pela exposição a MPTP. Posto isto, o primeiro objetivo deste trabalho, foi averiguar uma possível ação neuroprotetora da Klotho num modelo celular da doença de Parkinson. Para tal foram utilizadas culturas primárias enriquecidas em neurónios e co-culturas de neurónios-glia do mesencéfalo ventral, às quais foi adicionada Klotho recombinante. A toxicidade dopaminérgica foi induzida por exposição ao 1-metil-4-fenilpiridina (MPP+) e a extensão da lesão foi analisada por imunocitoquímica. Os resultados obtidos mostraram que a Klotho, quando aplicada exogenamente e previamente à lesão, previne a perda dos neurónios dopaminérgicos do mesencéfalo ventral induzida pela toxina dopaminérgica MPP+ e que a presença de astrócitos é importante para esta neuroprotecção. O mecanismo pelo qual exerce este efeito é ainda desconhecido e merece uma investigação mais aprofundada. A ação neuroprotetora da Klotho é abolida quando esta é administrada após ou no momento da indução da lesão dopaminérgica. O segundo objetivo deste trabalho, foi avaliar o papel da Klotho no controlo da inflamação mediada pela microglia. Utilizando culturas primárias enriquecidas em microglia do mesencéfalo ventral e o lipopolissacarídeo (LPS) como agente estimulante, verificámos que a Klotho consegue diminuir a libertação de NO pela microglia, induzida pelo LPS, sendo uma possível via pela qual a Klotho modula a reatividade microglial e consequentemente poderá exercer um efeito neuroprotetor. Conjuntamente, os resultados obtidos neste trabalho mostram pela primeira vez que a administração exógena da Klotho é neuroprotetora para os neurónios dopaminérgicos do mesencéfalo ventral e exerce um efeito anti-inflamatório na microglia, podendo ser um ponto de partida na compreensão do papel da Klotho no contexto da doença de Parkinson. Os efeitos da administração exógena desta proteína deverão ser investigados em modelos animais da doença de Parkinson a fim de avaliar o seu potencial terapêutico nesta doença.
- Construção de um vetor de expressão de TranstirretinaPublication . Xistra, Vera Mónica de Almeida; Santos, Cecília Reis Alves dosA doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa que afeta, aproximadamente, 48 milhões de pessoas a nível mundial e caracteriza-se por alterações cognitivas, perda de memória e alteração comportamental derivadas da falência progressiva dos neurónios. Esta falência possui diversas causas sendo de evidenciar a agregação de péptido ß-amilóide (Aß) e a acumulação de agregados neurofibrilares da proteína Tau. A transtirretina (TTR) é uma proteína cujas principais funções são: transporte, neuroprotecção e modulação, prevenindo a toxicidade do péptido Aß. É sintetizada no fígado e no plexus coróide. A terapia génica tem um potencial relevante para o tratamento de inúmeras doenças, incluindo a DA. Esta terapia é baseada na utilização de vetores de expressão que são inseridos em sistemas de entrega e introduzidos em hospedeiros que traduzem esses fragmentos de DNA em proteínas promovendo a sua expressão e auxiliando no tratamento das patologias. Com este projeto pretendeu-se construir um vetor de expressão não-viral que codifique para a TTR para utilização, como terapia génica, na DA. Este vetor foi nanoencapsulado com PEI e transfectado em células neuronais seguida de avaliação da expressão da TTR por Western Blot. Tendo em conta os objetivos deste projeto, construiu-se o vetor pCAG-hTTR que foi replicado em E.coli DH5a, purificado e inserido em nanopartículas formuladas com polietilenimina (PEI). A eficiência de encapsulação foi superior a 96% e o potencial zeta de -35,43±0,38 a 2,66±1,19 mV. Posteriormente, as células N27 que não apresentaram produção endógena de TTR foram transfectadas com o vetor pCAG-hTTR encapsulado com PEI. O ensaio da viabilidade celular efetuado 48h após a transfecção mostrou que esta foi superior a 78% diminuindo significativamente nas 72h subsequentes à transfecção. A proteína total extraída das células transfetadas foi quantificada e analisada por western blot. Os resultados foram inespecificos com marcação da TTR obtida até nos controlos negativos, sugerindo que o anticorpo utilizado não será o mais adequado ou uma transfecção ineficiente. Em suma, pela primeira vez foi possível construir um vetor de expressão que codifique para a TTR com a finalidade de promover a sua expressão e criar um sistema de entrega de nanopartículas formuladas com PEI para promover a sua entrega às células alvo. Contudo, não foi possível confirmar a sua expressão nas células transfetadas nem a eficiência de transfecção.
- Desenvolvimento de criogéis funcionalizados com barbituratos para a purificação de uma vacina de DNA plasmídico contra o InfluenzaPublication . Martins, Andreia Segura Pinheiro; Almeida, Paulo Jorge da Silva; Tomaz, Cândida Ascensão TeixeiraO vírus influenza é a causa de uma doença respiratória grave, comummente chamada de gripe, de elevada transmissibilidade e distribuição global e que provoca elevados níveis de mortalidade por todo o mundo. A melhor opção para travar esta doença viral e contagiosa é a vacinação. Apesar das vacinas da gripe convencionais, baseadas na tecnologia de ovos de galinha embrionados, serem normalmente eficazes, apenas conferem proteção contra as estirpes dominantes de cada ano e têm um risco zoonótico associado. Deste modo, são produzidas anualmente novas vacinas para antecipar as estirpes circulantes do vírus, processo que leva meses até estar concluído. As vacinas de DNA, baseadas na tecnologia do DNA recombinante, são uma alternativa promissora relativamente à vacinação convencional uma vez que são efetivas, e têm um processo de produção genérico e fácil de transpor para larga escala, em oposição ao complexo processo de produção associado às vacinas convencionais. Esta terapêutica consiste na expressão de um plasmídeo com os genes que codificam os antigénios de interesse num hospedeiro apropriado, permitindo a sua produção in vivo. No entanto, as vacinas de DNA requerem uma grande quantidade e com elevado grau de pureza, da isoforma superenrolada do DNA plasmídico biologicamente ativa. A cromatografia tem sido a técnica de escolha na purificação do pDNA por ser reprodutível, fiável e fácil de transpor para larga escala. No entanto, as matrizes convencionais usadas para este fim apresentam algumas limitações como as suas baixas propriedades de transferência de massa e baixa capacidade de ligação para moléculas maiores com o pDNA. Neste sentido, os criogéis podem ser utilizados no processo downstream por serem uma boa alternativa às matrizes cromatográficas convencionais, devido aos seus poros grandes e interconectados, boa difusibilidade e capacidade de ligação entre a molécula alvo e o suporte. O ácido barbitúrico, bem como os seus análogos tio- e/ou N,N-di-substituídos podem ser facilmente ligados aos criogéis ativados com grupos epóxido fazendo uso da bem descrita reatividade nucleofílica do C-5 na forma de enol ou enolato. Deste modo, foram preparados suportes cromatográficos baseados em criogéis derivatizados em condições acídicas e utilizando ligandos barbitúricos representativos como o ácido barbitúrico, tiobarbitúrico e 1,3-difenil-2-tiobarbitúrico, com diferentes concentrações de ligando. Assim, no presente trabalho de investigação, foi testada a purificação do pDNA NTC 7482-41H-VA2 HA com 6.471 kbp que codifica a glicoproteína antigénica de superfície do vírus influenza, hemaglutinina, utilizando suportes de criogéis derivatizados com barbituratos. Para isto, foram quimicamente sintetizadas colunas de criogel com diferentes densidades de ligando. Inicialmente, foi estudado o perfil de retenção e eluição bem como a separação da isoforma superenrolada do pDNA da isoforma circular aberta, com base nas diferentes matrizes sintetizadas, sendo a coluna de criogel com ácido 1,3-difenil-2-tiobarbitúrico com 5,0 mg/mL, aquela que demonstrou os melhores resultados, sendo por isso a escolhida para os estudos posteriores de separação de isoformas. Este suporte foi explorado através da manipulação de diferentes concentrações de sal e valores de pH, nos equipamentos cromatográficos Flash Protein Liquid Chromatographic e ÄKTA Purifier, numa tentativa de separar a isoforma superenrolada do pDNA como exigido pelas agências reguladoras. A melhor estratégia de separação das isoformas consistiu na aplicação de um gradiente crescente de cloreto de sódio usando 10,0 mM de tampão acetato de sódio com pH 5,0 como passo de ligação, e uma estratégia de eluição por dois passos usando o mesmo tampão com 0,550 M, seguido de 1,0 M de cloreto de sódio, que resultou numa separação parcial das isoformas sc e oc do pDNA do amostra pré-purificada. Na amostra de lisado, a utilização de 10,0 mM de tampão acetato de sódio com pH 5,0 como passo de ligação, e uma estratégia de eluição por dois passos usando o mesmo tampão com 0,263 M, seguido de 2,500 M de cloreto de sódio promoveu a separação da isoforma superenrolada do DNA do RNA, proteínas e outras impurezas com 65,60 % de pureza e um grau de recuperação de 88,0 %. Os resultados obtidos demonstram a aplicabilidade dos criogéis de ácido 1,3-difenil-2-tiobarbitúrico com 5,0 mg/mL na separação e purificação das vacinas de pDNA contra o vírus influenza por cromatografia de afinidade.