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- Caracterização de sistemas de bombas de efluxo de Aliarcobacter butzleriPublication . Nunes, Ana Rita de Almeida; Ferreira, Susana Margarida Paraíso; Domingues, Fernanda da Conceição; Oleastro, Mónica Alexandra de SousaAliarcobacter butzleri é um enteropatogéneo emergente reconhecido como a quarta espécie mais comum em amostras diarreicas entre os Campylobacter-like organisms, encontrando-se na lista de microrganismos considerados um perigo grave para a saúde humana, pela Comissão Internacional em Especificações Microbiológicas para Alimentos. Este organismo patogénico é conhecido por apresentar múltipla resistência a antibióticos, podendo assim originar um problema no tratamento de infeções causadas por esta bactéria. Informação prévia acerca desta bactéria sugere que a mesma contém diversos sistemas putativos de efluxo que permanecem por caracterizar, e que poderão ter um papel relevante como mecanismos de resistência a antimicrobianos. Assim, com este trabalho pretendeu-se estudar o papel de cinco sistemas de efluxo distintos, todos da família "Resistance nodulation cell division". Para tal, o estudo foi iniciado com construção de mutantes de A. butzleri, utilizando uma estirpe naturalmente transformável(AB28/11), através da interrupção dos genes codificantes da proteína de membrana interna responsável pelo reconhecimento do substrato. Dos cinco sistemas em estudo só foi possível gerar mutantes para três, onde se procedeu à interrupção dos genes areB, areE e areG, correspondentes às bombas de efluxo AreABC, AreDEF e AreGHI, respetivamente. A construção dos mutantes foi confirmada pela técnica de “Reverse Transcription-Polimerase Chain Reaction”. Posteriormente, foram realizados uma série de testes para comparação entre os mutantes e a estirpe parental. Quanto ao crescimento bacteriano não foram observadas diferenças significativas entre estirpes. De seguida, foi avaliada a contribuição de cada sistema de efluxo em estudo para a resistência a antibióticos, sais biliares e biocidas, pela determinação da concentração mínima inibitória pelo método de microdiluição. Os resultados mostram que: a inativação do gene areG teve um impacto na resistência a cinco das seis classes de antibióticos testadas, bem como na resistência a diversos biocidas; a inativação do gene areB teve um impacto na resistência às cefalosporinas, estreptomicina, fluoroquinolonas e macrólidos; o perfil fenotípico de resistência do mutante AB28/11?areE foi semelhante à estirpe parental. Para além disso, procedeu-se à avaliação do papel do sistema de efluxo na acumulação intracelular de compostos, usando um método de fluorescência, que avaliou a acumulação de brometo de etídio, nas estirpes parental e mutantes. Esta avaliação demonstrou que a bomba AreABC apresenta um papel importante na extrusão de compostos tóxicos, visto que se observou uma maior acumulação de brometo de etídio do que a observada para a estirpe parental, demonstrando uma menor atividade global dos sistemas de efluxo das células. Em suma, com este trabalho foi possível caraterizar o papel dos sistemas de efluxo AreABC, AreDEF e AreGHI na resistência de A. butzleri, tendo-se destacado o potencial papel dos sistemas AreABC e AreGHI para a multirresistência desta bactéria.
- Development of new Catechol-Omethyltransferase inhibitorsPublication . Vicente, Pedro Miguel da Cruz; Silvestre, Samuel Martins; Passarinha, Luís António Paulino; Gonçalves, Ana MargaridaThe Catechol-O-methyltransferase (COMT, EC 2.2.1.6) is an enzyme responsible for the Omethylation of catechol substrates, such as catecholamines and catechol estrogens. Considering its physiological functions and the existence of polymorphisms, several studies associate COMT with the pathogenesis of several neurological disorders, especially with Parkinson’s Disease (PD) as well as with cardiovascular and hormone-dependent cancers, like breast cancers. Given the important role that COMT has in the catecholamines and catechol estrogens metabolism, COMT has become a relevant therapeutic target. Currently, the most effective and clinically approved by the Federal Drug Administration and the European Medicines Agency for the PD therapy consists of the use of Levodopa, combined with COMT inhibitors. Since the commercially available inhibitors for this enzyme still display a lot of disadvantages, like hepatoxicity, difficulty to reach the brain, among others, the main goal of this work was to develop new COMT inhibitors with potential clinical interest for the PD therapy. For this, triazolopyrimidinics were prepared through the Biginelli reaction, that can be considered catechol bioisosteres, therefore have a higher potential to interact with COMT. This hypothesis was confirmed through molecular docking, being predicted similar interactions as the ones that the catecholic substrates forms with the COMT active site. Their inhibitory properties were evaluated in human recombinant COMT lysates, after the compounds’ incubation at 10 and 100 µM. Contrary to what was expected, the compounds increased the enzyme specific activity, being considered COMT stabilizers. The compounds cytotoxicity was also evaluated in neural dopaminergic rat cells (N27), in the same concentrations. The vast majority of compounds at 10 µM did not exhibited cytotoxicity, being observed similar values to those of the commercial COMT inhibitors, Entacapone and Tolcapone, in the studied cell line. As expected, with the increase in compounds’ concentration (100 µM) a decrease in the relative cell proliferation was observed, reaching values considered to be cytotoxic. Altogether, the synthesized compounds at the concentration of 10 µM stabilized COMT and did not induce cytotoxicity in the N27 cells. In sum, these compounds may be useful for thermal stability assays, crystallography, structure-activity relationship studies and display potential to be studied in specific breast cancers cell lines.
- Desenvolvimento de mobiliário escolar para comunidades rurais da província do HuamboAngolaPublication . Calunda, Silândio Emanuel Fernandes; Baptista, Julio Londrim de Sousa CruzO tema proposto descreve a prática de projeto na criação de uma linha de mobiliário escolar para as zonas rurais do Huambo, província de Angola. Foram aplicados os princípios das Appropriate Technologies (AT), de forma a tirar partido dos recursos materiais e potenciar a mão de obra local. Para o efeito foi feito um estudo dos recursos naturais da província do Huambo, da tecnologia existente e capacidades da mão de obra disponível que possam tirar partido do conceito de AT, Assim como, da realidade geográfica de Angola efetuando-se um reconhecimento dos materiais oferecidos pelo território, tecnologias e recursos humanos, assim como, percecionar as necessidades mais prementes das populações rurais. Isso permitiu projetar segundo os parâmetros preconizados pelo conceito de AT. Neste trabalho são descritas as várias fases de projeto e de produção, desde o conceito inicial até ao protótipo final. Este projeto teve como intenção permitir o entendimento e aplicação das ATs num contexto rural de um País Emergente (PE) na criação de produtos de design, que tirem partido dos recursos locais e possam ter uma viabilidade económica e que seja um fator de desenvolvimento das populações autóctones: mobiliário escolar de fácil construção pela mão de obra local, e de preços acessíveis que permitam a comercialização do produto ao nível regional e nacional. Este tipo de abordagem permite mitigar os problemas decorrentes da escassez deste tipo de equipamento nas escolas das comunidades rurais do território angolano, e também ajudar o desenvolvimento de fábricas de pequena escala e oficinas familiares que existem disseminadas pelo território angolano. Com base neste estudo do território, e também através de exemplos já formulados por designers e ONGs para outros Países Emergentes, foram desenvolvidos dois protótipos iniciais com o objetivo de se fazer o lançamento de duas linhas de mobiliário escolar distintas na utilização dos materiais.