Publication
Aplicação de dried blood spots na deteção e quantificação de canabinóides por cromatografia de gases/espectrometria de massas em tandem
| datacite.subject.fos | Engenharia e Tecnologia::Engenharia Química | por |
| dc.contributor.advisor | Alba, Maria Eugénia Gallardo | |
| dc.contributor.author | Caetano, Mariana Nogueira | |
| dc.date.accessioned | 2018-11-05T14:43:22Z | |
| dc.date.available | 2018-11-05T14:43:22Z | |
| dc.date.issued | 2016-10-31 | |
| dc.date.submitted | 2016-10-10 | |
| dc.description.abstract | A canábis é a droga ilícita mais comum e mais consumida mundialmente, como tal, é importante contribuir para o desenvolvimento de metodologias que tornem os laboratórios mais eficazes na identificação e quantificação desta substância psicoativa. O objetivo deste trabalho de investigação foi o desenvolvimento e validação de um método analítico por cromatografia de gases associada à espectrometria de massas em tandem (GS/MS-MS) e Dried Blood Spots (BDS) para a determinação e quantificação de delta-9-tetrahidrocanabinol, 11-hidroxi-delta-9-tetrahidrocanabinol e 11-nor-9-carboxi-delta-9-tetrahidrocanabinol em amostras de sangue. É de salientar que é a primeira vez que estes compostos são determinados por DBS e GS/MS-MS. Os fatores que podiam influenciar o processo de extração foram avaliados: tipo de solvente de extração (metanol, acetonitrilo, diclorometano, 2-propanol, hexano e acetato de etilo), volume de solvente de extração (2 a 5 mL), tempo de extração (10 a 60 min), tempo de centrifugação (10 a 30 min) e tempo de secagem da mancha de sangue (3h a overnight). As condições finais são as seguintes: aplicar 100 µL de sangue em cartões Whatman® Human ID Bloodstain Card e deixar secar durante 6h; após este tempo, a mancha que contém a amostra é retirada do cartão e são adicionados 4 mL de metanol. O processo de extração é efetuado sob agitação durante 40 min. Finalizado este tempo procede-se à remoção do cartão. A amostra é centrifugada durante 20 min a 3000 rpm, e o sobrenadante evaporado e derivatizado com MSTFA/TMCS num micro-ondas a 800W durante 2 min. O método foi validado seguindo critérios internacionalmente aceites e os parâmetros estudados incluíram linearidade, seletividade, limites de deteção (LOD) e quantificação (LLOQ), precisão e exatidão. A seletividade foi avaliada e não foram observadas interferências procedentes de substâncias endógenas ou de outras drogas eventualmente presentes nos diferentes tempos de retenção e iões dos analitos em estudo. O procedimento foi linear para o intervalo de concentrações de 1 até 30 ng/mL, com coeficientes de determinação superiores a 0,99 para todos os analitos. As precisões intra- e inter-dia foram tipicamente inferiores a 15% para todos os analitos. Os LODs foram de 1 ng/mL para todos os compostos e as recuperações variaram entre 14% e 88%. O método validado mostrou ser aplicável à análise de amostras reais, sendo então uma ferramenta vantajosa não só no âmbito de análises de toxicologia clínica e forense, mas também em análises de despistagem de consumo de canábis. | por |
| dc.description.abstract | Cannabis is the most common and consumed illegal drug worldwide, and therefore the development of methodologies capable of making laboratories more effective on the identification and quantification of these psychoactive substances is necessary. The goal of this research work was the development and validation of an analytic method using gas chromatography coupled to tandem mass spectrometry (GS/MS-MS), using Dried Blood Spots (DBS), for the determination and quantification of delta-9-tetrahydrocannabinol, 11-hydroxi-delta-9-tetrahydrocannabinol and 11-nor-9-carboxi-delta-9-tetrahydrocannabinol in blood samples. It should be noted that this is the first time that these compounds are determined by means of DBS and GC/MS-MS. The factors which might influence the extraction were screened previously: type of solvent extraction (methanol, acetonitrile, dichloromethane, 2-propanol, hexane and ethyl acetate), volume of solvent of extraction (2 to 5 mL), time of extraction (10 to 60 min), centrifugation time (10 to 30 min) and time of dried sample spot (3 h to overnight). The final process was as follows: 100 µL of blood was applied to Whatman® Human ID Bloodstain Card and dried for 6h. After that, 4 mL of methanol was added and a slight agitation for 40 min has followed. The card was removed and the samples were centrifuged 20 min at 3000 rpm. The extract was evaporated to dryness and derivatized with MSTFA/TMCS in a microwave oven at 800 W for 2 min. The method was validated following internationally accepted criteria, including selectivity, linearity, limits of detection (LOD) and quantification (LLOQ), precision and accuracy, stability and recovery. Selectivity was evaluated by analysis of blank samples, and no interferences from endogenous substances were observed, and other drugs eventually present had different retention times and/or could not be detected using our method’s conditions. The procedure was linear for concentrations ranging from 1 to 30 ng/mL with determination coefficients higher than 0.99 for all analytes. The LODs were 1 ng/mL for all compounds and the recoveries ranged between 14 and 88 %. The method was shown to be applicable to real samples, therefore being a powerful tool not only for clinical and forensic toxicology purposes, but also to assess the consumption of cannabis and derived products. | eng |
| dc.identifier.tid | 201772000 | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.6/6296 | |
| dc.language.iso | por | por |
| dc.subject | Canabinóides | por |
| dc.subject | Dried Blood Spots | por |
| dc.subject | Gc/Ms-Ms | por |
| dc.subject | Toxicologia | por |
| dc.title | Aplicação de dried blood spots na deteção e quantificação de canabinóides por cromatografia de gases/espectrometria de massas em tandem | por |
| dc.type | master thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| rcaap.rights | openAccess | por |
| rcaap.type | masterThesis | por |
| thesis.degree.name | 2º Ciclo em Bioquímica | por |
Files
Original bundle
1 - 1 of 1
No Thumbnail Available
- Name:
- 5140_10314.pdf
- Size:
- 2.33 MB
- Format:
- Adobe Portable Document Format