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Estudo da influência da idade dos fibroblastos em cultura na resposta ao 17ß-estradiol
| dc.contributor.advisor | Granadeiro, Luiza Augusta Tereza Gil Breitenfeld | |
| dc.contributor.author | Jacob, Verónica Pereira | |
| dc.date.accessioned | 2013-01-21T17:03:31Z | |
| dc.date.available | 2013-01-21T17:03:31Z | |
| dc.date.issued | 2011-10 | |
| dc.description.abstract | A cultura de células apresenta nos dias que correm uma importância indubitável, tratando-se de uma ferramenta de estudo frequentemente utilizada em várias áreas de investigação das Ciências da Saúde. Os fibroblastos compreendem uma população de células heterogénea e dinâmica, amplamente distribuída pelos tecidos conjuntivos dos vertebrados, onde desempenham funções fulcrais na regulação estrutural e fisiológica dos tecidos. Por serem parte integrante da pele humana, apresentarem características favoráveis ao estabelecimento de culturas e por expressarem receptores específicos para neurotransmissores e hormonas, particularmente, receptores de estrogénio, os fibroblastos da derme humana, da linha celular NHDF, constituem um possível modelo de estudo da resposta ao 17β-estradiol (E2). O principal objectivo deste trabalho consistiu no estudo da influência das passagens celulares, de culturas de fibroblastos NHDF, na resposta ao E2. Simultaneamente, também foi averiguada a interferência de diferentes condições de cultura na proliferação celular estimulada por estrogénio. Este estudo foi realizado em passagens celulares contíguas de fibroblastos NHDF, que foram expostos ao E2 por períodos de incubação crescentes (0, 48, 96 e 144 horas), na presença de meios de cultura diferentes na sua suplementação, nomeadamente: meio de cultura suplementado com 10 % de soro bovino fetal (FBS); meio de cultura sem FBS; e meio de cultura suplementado com 5% de FBS tratado com carvão activado. Para a quantificação da resposta dos fibroblastos ao E2 foi utilizado o ensaio de viabilidade celular baseado na redução do brometo de 3- (4,5-dimetil-2-tiazolil)-2,5-difenil-2H-tetrazólio (MTT), juntamente com o ensaio de exclusão de trypan blue. Os resultados obtidos confirmam a influência das condições de cultura e da passagem celular nos estudos de resposta dos fibroblastos NHDF ao E2. Apenas foi verificada reprodutibilidade entre a resposta de quatro passagens celulares contíguas, quando os fibroblastos foram incubados por um período de 48 horas em meio suplementado com FBS. Adicionalmente, também foi este o meio de cultura onde se verificou existir maior correspondência entre os valores de absorvência de MTT e o número de células contabilizado. Por outro lado, somente foi visível uma proliferação significativa (P<0,05) dos fibroblastos em resposta à presença de E2 quando estes foram incubados em meio com FBS por 96 horas. Uma vez que os melhores resultados foram obtidos nas culturas incubadas em meio com FBS, sugere-se que, através do ajuste do número de células com que se iniciam os estudos de resposta a estrogénios, poderá ser alcançado um equilíbrio entre a reprodutibilidade e sensibilidade demonstrada neste meio. Ainda assim, propõe-se que num procedimento ideal todas as experiências de um mesmo estudo deveriam ser efectuadas em células da mesma passagem. | por |
| dc.description.abstract | Cell culture is of extreme importance nowadays, since it is a study tool often used in various areas of research in Health Sciences. The fibroblasts cover a heterogeneous and dynamic population of cells, widely distributed in the connective tissues of vertebrates, where they have an important role in the structural and physiological regulation of the tissues. The fibroblasts are an integral part of the human skin, and present favorable characteristics to be cultured. Likewise, they express specific receptors for neurotransmitters and hormones, particularly the estrogen receptors. Thus, the human dermal fibroblasts of the NHDF cell line form a possible study model of response to 17β-estradiol (E2). The main objective of this work consisted in the study of the influence of cell passages of the NHDF fibroblast cultures, in response to E2. The interference of different culture conditions in cell proliferation, by estrogen stimulation, was also studied. This study was carried out on contiguous cell passages of NHDF fibroblasts, which were exposed to E2 with increasing incubation periods (0, 48, 96 and 144 hours), in the presence of different culture medium such as: (i) culture medium supplemented with 10% of fetal bovine serum (FBS); (ii) culture medium without FBS; and (iii) culture medium supplemented with 5% charcoal Stripped FBS. The response of the fibroblasts to E2 was quantified by the trypan blue exclusion assay and by cell viability analysis, which is based on the reduction of 3- (4,5 -dimethyl-2-thiazolyl)-2,5- diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT assay). The results confirm the influence of culture conditions and cell passage on the study of the response of NHDF fibroblasts to E2. The reproducibility between the response of four contiguous cell passages was verified, only when the fibroblasts were incubated for a period of 48 hours in the culture medium supplemented with FBS. In addition, it was also in this culture medium where there was a better correspondence between the absorbance values of MTT and the number of counted cells. On the other hand, there was a significant proliferation (P<0,05) of fibroblasts in response to the presence of E2, when they were incubated in the culture medium with FBS for 96 hours. Since the best results were obtained in the culture medium with FBS, these results suggest that, through the adjustment of the number of starting cells in the research studies of response to estrogens, a balance between the reproducibility and sensibility demonstrated in this medium may be achieved. Nevertheless, as a future prospective, the ideal procedure should have all the experiences of the same study carried out on the same cell passage. | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.6/943 | |
| dc.language.iso | por | por |
| dc.peerreviewed | yes | por |
| dc.publisher | Universidade da Beira Interior | por |
| dc.subject | Fibroblastos | por |
| dc.subject | Fibroblastos NHDF | por |
| dc.subject | Fibroblastos NHDF - E2 - Estudo | por |
| dc.title | Estudo da influência da idade dos fibroblastos em cultura na resposta ao 17ß-estradiol | por |
| dc.type | master thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| oaire.citation.conferencePlace | Covilhã | por |
| rcaap.rights | openAccess | por |
| rcaap.type | masterThesis | por |
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