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Avaliação da atividade anticancerígena de aptameros de DNA para terapia do cancro do colo do útero
| datacite.subject.fos | Ciências Naturais::Ciências Químicas | por |
| dc.contributor.advisor | Cruz, Carla Patrícia Alves Freire Madeira | |
| dc.contributor.author | Ribeiro, Márcia Filipa Pinto | |
| dc.date.accessioned | 2020-03-23T16:33:41Z | |
| dc.date.available | 2020-10-01T00:30:16Z | |
| dc.date.issued | 2018-11-06 | |
| dc.date.submitted | 2018-10-03 | |
| dc.description.abstract | O cancro do colo do útero é dos tipos de cancro mais frequentes nas mulheres e é causado por uma infeção com o vírus do papiloma humano (HPV). As terapias usadas neste tipo de patologia, tais como quimioterapia e radioterapia, não são seletivas provocando efeitos indesejados. Atualmente têm sido estudadas terapias mais seletivas, que têm como base a utilização de aptameros de G4 de DNA. Os aptameros de G4 são estruturas secundárias não canónicas de ácidos nucleicos, altamente ordenadas e que se formam a partir do enrolamento de sequências ricas em guaninas. Neste projeto estudou-se estruturalmente o aptamero G4 AT11 e os complexos por ele formados com derivados de laranja de acridina e de fenantrolinas em termos de estabilidade, afinidade, atividade anticancerígena e localização intracelular. Ensaios de dicroísmo circular confirmaram a formação da estrutura de G4 pelo AT11 e experiências de desnaturação térmica mostraram que os derivados de laranja de acridina C8 e C8-NH2 promovem uma maior estabilização térmica do aptamero G4 AT11 (?Tm > 20ºC) seguidos dos derivados de fenantrolinas (?Tm > 18ºC). Através de titulações por espectroscopia de fluorescência, obtiveram-se valores de afinidade do ligando-G4 AT11 moderados a altos, com resultados entre 1,60x10 -6 e 2,01x10-7 M-1 . Relativamente à atividade anticancerígena, o aptamero G4 AT11 mostrou ser mais citotóxico para células HeLa comparativamente às células NHDF; porém, os resultados mais promissores foram obtidos com os complexos ligando-G4 AT11, uma vez que os valores de viabilidade celular destes são menores nas HeLa e maiores nas NHDF quando comparados com os ligandos livres. A nível de localização celular, os resultados mostraram que o aptamero G4 AT11 localiza-se no citoplasma, o ligando C8 parcialmente no citoplasma e nucléolo, e o complexo por estes formado apenas a nível citoplasmático (com formação a partir das 24 h). Assim, conclui-se que a formação dos complexos aptamero G4 AT11-ligandos são uma estratégia promissora para terapia do cancro do colo do útero. | por |
| dc.description.abstract | Cervical cancer is one of the most common types of cancer in women and is caused by an infection with the human papilloma virus (HPV). The therapies used in this type of pathology, such as chemotherapy and radiotherapy, are not selective causing undesirable effects to patients. More selective therapies have been investigated based on the use of G4 DNA aptamers. G4 aptamers are high ordered non-canonical secondary structures of nucleic acids which are formed from sequences rich in guanines. In this project the structure of aptamer G4 AT11 was studied as well as the complexes formed with acridine orange derivatives and phenanthrolines in terms of stability, binding affinity, anticancer activity and intracellular localization. Circular dichroism experiments confirmed the formation of G4 structure in AT11 and melting experiments showed that the acridine orange derivatives C8 and C8-NH2 promote high thermal stabilization of the G4 AT11 aptamer (?Tm values > 20ºC) followed by the phenanthroline derivatives (?Tm values > 18ºC). The binding affinity of ligand-G4 AT11 was determined by fluorescence titrations with KD between 1,60x10-6 and 2,01x10-7 M-1 indicating moderate to high affinity. Regarding anticancer activity, the G4 AT11 aptamer was shown to be more cytotoxic in HeLa cells compared to NHDF cells; however, the most promising results were obtained in the formation of ligand-G4 AT11 complexes, since cellular viability values are lower in HeLa cells and higher in NHDF cells when compared to free ligands. At cellular localization, the results showed that the G4 AT11 aptamer is localized at cytoplasm, the acridine orange derivative C8 is localized at the cytoplasm and nucleolus and the complex formed is localized only at cytoplasm (from 24 h). Thus, it is concluded that the formation of the complex G4 AT11-ligand is a promising strategy for therapy of cervical cancer. | eng |
| dc.identifier.tid | 202348857 | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.6/10195 | |
| dc.language.iso | por | por |
| dc.subject | Aptamero G4 At11 | por |
| dc.subject | Cancro do Colo do Útero | por |
| dc.subject | Derivados de Laranja de Acridina e Derivados de Fenantrolinas | por |
| dc.subject | G-Quadruplex | por |
| dc.subject | Nucleolina | por |
| dc.title | Avaliação da atividade anticancerígena de aptameros de DNA para terapia do cancro do colo do útero | por |
| dc.type | master thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| rcaap.embargofct | contem dados temporariamente confidenciais | por |
| rcaap.rights | openAccess | pt_PT |
| rcaap.type | masterThesis | por |
| thesis.degree.name | 2º Ciclo em Bioquímica | por |
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