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Authors
Abstract(s)
The brain represents one of the organs that consumes the most oxygen, having an
irreplaceable function in the body. In turn, to perform it correctly needs to be in
homeostasis, so it contains a network that is responsible for this homeostasis, which is
called the neurovascular unit. This is composedofneurons, astrocytes, endothelial cells,
and mural cells, as pericytes and smooth muscle cells that perform different functions
within the brain that are essential for good performance on this.
This work presents two aims: establishment of a protocol to a pure culture of
endothelial cells from cerebral arteries, in whichthe effect of puromycin, an antibiotic
that induce cellular death on smooth muscle cells was analysedthrough
immunocytochemical assays. The other was the study of the effect of retinoic acid on
the contraction and relaxation mechanisms present on the smooth muscle cells, using
the Planar Cell Surface Area technique.
In the first study, endothelial cell cultures of rat were obtained by extracting the middle
cerebral arteries and the basilar artery. In the second study, the culture of smooth
muscle cells of rat was obtained onlyextracting the middle cerebral arteries.
Thus, in the first study endothelial cells cultures incubated with a concentration of
2µg/ml of puromycin for 24 h, showed a purity of 90% and those of 4 µg/ml
approximately 20%. In turn, in the PCSA assay, on the results obtained ingenomic
tests, only one of the incubated concentrations of Retinoic Acid presents
vasorelaxation, that of 0.5 µmol/L, with a percentage of 5% relaxation. In non-genomic
tests, the RA rapid effect, at a concentration of 10 µg/ml, shows a percentage of
vasorelaxation in order of 10%.
Therefore, in the first study, the results obtained suggest that puromycin can be used as
an antibiotic to obtain pure cultures of endothelial cells at a specific concentration, in
this case 2 µg/ml. The results obtained on the effect of retinoic acid on smooth muscle
cells suggest that, in a 24-h incubation period, retinoic acid at 0.5µg/mL has
vasorelaxant effects on smooth muscle cells. Moreover, without incubation witha
concentration of 10µg/ml, the results demonstratea relaxant effect.
O cérebro representa um dos órgãos que consome mais oxigénio, tendo por sua vez uma função insubstituível no organismo. Assim para a desempenhar corretamente, o cérebroprecisa de estar em homeostase, sendo assim, contém uma rede que é responsável por esta homeostase, a que se dá o nome de unidade neurovascular. Esta é composta por neurónios, astrócitos, células endoteliais e células murais, como os pericitios e as células do músculo liso, que desempenham diferentes funções fulcrais dentro do cérebro. Este trabalho apresenta dois objetivos principais, o estabelecimento de um protocolo para uma cultura primária de células endoteliais puras de artérias cerebrais. Assim, foi testado o efeito de um antibiótico que induz morte celular nas células do musculo liso, a puramicina tendo sido estudado este efeito em ensaios de imunocitoquímica. Outro dos objetivos foi o estudo do efeito do ácido retinóico nos mecanismos de contração e dilatação presentes nas células do músculo liso utilizando a técnica Planar Cell Surface Area. No primeiro estudo, a cultura de células endoteliais de rato foi obtida a partir da extração das artérias cerebrais médias e da artéria basilar. Já no segundo estudo, a cultura de células musculares lisas de rato foi obtida apenas pela extração das artérias cerebrais médias. Posto isto, no primeiro estudo, as culturas de células endoteliais incubadas com uma concentração de 2 µg/mL de puramicina durante 24 h, apresentaram uma pureza de 90% e as de 4 µg/mL aproximadamente 20%. Por sua vez, no ensaio de Planar Cell Surface Areanos resultados obtidos nos testes genómicos, só uma das concentrações incubadas de ácido retinóico apresenta vasorelaxamento, a de 0.5µmol/L, tendo uma percentagem de 5% de relaxamento. Já nos testes não genómicos, isto é o efeito rápido, à concentração de 10µg/mL o ácido retinóico apresenta uma percentagem de vasorelaxamento na ordem dos 10%. Assim sendo, no primeiro estudo os resultados obtidos sugerem que a puramicina pode ser utilizada como antibiótico na obtenção de culturas puras de células endoteliais numa concentração específica, neste caso 2 µg/mL. Já os resultados obtidos no estudo do efeito do ácido retinóico nas células do músculo liso, sugerem que numa incubação de 24 h o ácido retinóico a 0.5 µg/mL traz efeitos vasorelaxantes nas células musculares lisas e que sem incubação, a uma concentração de 10 µg/mL também apresenta efeitos relaxantes nas células musculares lisas.
O cérebro representa um dos órgãos que consome mais oxigénio, tendo por sua vez uma função insubstituível no organismo. Assim para a desempenhar corretamente, o cérebroprecisa de estar em homeostase, sendo assim, contém uma rede que é responsável por esta homeostase, a que se dá o nome de unidade neurovascular. Esta é composta por neurónios, astrócitos, células endoteliais e células murais, como os pericitios e as células do músculo liso, que desempenham diferentes funções fulcrais dentro do cérebro. Este trabalho apresenta dois objetivos principais, o estabelecimento de um protocolo para uma cultura primária de células endoteliais puras de artérias cerebrais. Assim, foi testado o efeito de um antibiótico que induz morte celular nas células do musculo liso, a puramicina tendo sido estudado este efeito em ensaios de imunocitoquímica. Outro dos objetivos foi o estudo do efeito do ácido retinóico nos mecanismos de contração e dilatação presentes nas células do músculo liso utilizando a técnica Planar Cell Surface Area. No primeiro estudo, a cultura de células endoteliais de rato foi obtida a partir da extração das artérias cerebrais médias e da artéria basilar. Já no segundo estudo, a cultura de células musculares lisas de rato foi obtida apenas pela extração das artérias cerebrais médias. Posto isto, no primeiro estudo, as culturas de células endoteliais incubadas com uma concentração de 2 µg/mL de puramicina durante 24 h, apresentaram uma pureza de 90% e as de 4 µg/mL aproximadamente 20%. Por sua vez, no ensaio de Planar Cell Surface Areanos resultados obtidos nos testes genómicos, só uma das concentrações incubadas de ácido retinóico apresenta vasorelaxamento, a de 0.5µmol/L, tendo uma percentagem de 5% de relaxamento. Já nos testes não genómicos, isto é o efeito rápido, à concentração de 10µg/mL o ácido retinóico apresenta uma percentagem de vasorelaxamento na ordem dos 10%. Assim sendo, no primeiro estudo os resultados obtidos sugerem que a puramicina pode ser utilizada como antibiótico na obtenção de culturas puras de células endoteliais numa concentração específica, neste caso 2 µg/mL. Já os resultados obtidos no estudo do efeito do ácido retinóico nas células do músculo liso, sugerem que numa incubação de 24 h o ácido retinóico a 0.5 µg/mL traz efeitos vasorelaxantes nas células musculares lisas e que sem incubação, a uma concentração de 10 µg/mL também apresenta efeitos relaxantes nas células musculares lisas.
Description
Keywords
Ácido Retinóico Células do Musculo Liso Células Endoteliais Puramicina Unidade Neurovascular