Publication
Biosynthesis, solubilization and purification of human membrane bound catechol-O-methyltransferase in brevibacillus choshinensis cells
| datacite.subject.fos | Domínio/Área Cientifica::Engenharia e Tecnologia::Engenharia Química | |
| dc.contributor.advisor | Passarinha, Luís António Paulino | |
| dc.contributor.advisor | Baptista, Cláudio Jorge Maia | |
| dc.contributor.author | Pedro, Augusto Quaresma Henriques | |
| dc.date.issued | 2011 | |
| dc.description.abstract | As proteínas membranares constituem cerca de 20 a 30 % de todas as proteínas codificadas pelo genoma de vários organismos. Elevadas quantidades de proteínas num estado de elevada pureza são necessárias quer para estudos farmacológicos, quer para estudos cristalográficos, daí a imperativa necessidade de desenvolver novos sistemas para a sobre-expressão heteróloga de proteínas membranares. Especificamente, nós testámos a aplicação de Brevibacillus choshinensis para a biosíntese da isoforma membranar da catecol-Ometiltransferase humana. No que diz respeito ao processo de produção, obteve-se uma moderada a elevada expressão num meio complexo com um valor de 45 nmol/h/mg para a actividade biológica da hMBCOMT, atingida às 20 horas de cultura a 37 ºC e 250 rpm. No que diz respeito à solubilização da proteína alvo, a eficiência de reconstituição para a hMBCOMT é nula na presença de detergentes iónicos tais como o SDS. No entanto, a aplicação de baixas concentrações de detergentes não-iónicos parece ser ideal para solubilizar a fracção membranar visto que a hMBCOMT recombinante retém elevados valores para a actividade biológica. Dos detergentes testados, a digitonina a 0.5 % (m/v) parece ser o mais adequado. De facto, o método descrito nesta tese é simples e poder-se-á tornar muito útil se aplicado num diagrama global para o isolamento da MBCOMT tendo em vista a sua caracterização bioquímica ou biofísica, onde se destaca a determinação da sua estrutura por cristalografia de raios-X ou estudos de interacção da hMCOMT com inibidores. | por |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.6/2499 | |
| dc.language.iso | por | por |
| dc.subject | Proteínas membranares | por |
| dc.subject | Proteínas - Produção heteróloga | por |
| dc.subject | MBCOMT humana | por |
| dc.subject | Doença de Parkinson | por |
| dc.title | Biosynthesis, solubilization and purification of human membrane bound catechol-O-methyltransferase in brevibacillus choshinensis cells | por |
| dc.type | master thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| person.familyName | Quaresma Henriques Pedro | |
| person.givenName | Augusto | |
| person.identifier | https://scholar.google.com/citations?user=oer44UoAAAAJ&hl=pt-PT&oi=ao | |
| person.identifier.ciencia-id | 7111-B2BE-336D | |
| person.identifier.orcid | 0000-0001-8194-6022 | |
| person.identifier.scopus-author-id | 54080426100 | |
| rcaap.rights | openAccess | por |
| rcaap.type | masterThesis | por |
| relation.isAuthorOfPublication | e105301c-3c7f-4705-961d-944d6db208dd | |
| relation.isAuthorOfPublication.latestForDiscovery | e105301c-3c7f-4705-961d-944d6db208dd | |
| thesis.degree.name | Mestrado em Bioquímica | por |