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Têm sido propostos vários processos baseados na cromatografia, mas a cromatografia de
afinidade é considerada a técnica mais específica para a separação do pDNA, uma vez que
permite o isolamento desta biomolécula a partir de uma mistura devido ao reconhecimento
bioespecífico pelo ligando imobilizado. Pode-se dizer que o recente sucesso desta técnica para a
purificação do pDNA baseia-se na bioespecificidade e, a utilização de aminoácidos como
ligandos imobilizados produziu recentemente resultados interessantes. Assim, a cromatografia
de afinidade baseada em aminoácidos representa sobretudo uma abordagem promissora para
purificar biomoléculas, pois combina a selectividade de uma interacção biológica que ocorre
naturalmente com a simplicidade de uma única molécula pequena. A histidina e a arginina já
revelaram a sua grande aplicabilidade para isolar a isoforma superenrolada do pDNA e,
portanto, indicando a presença de interacções específicas entre o pDNA para ambos os
aminoácidos.
Neste trabalho são apresentados os resultados sobre a utilização de uma série de ligandos
modificados da histidina e da arginina na purificação de plasmídeos para terapia génica.
Referiu-se também a preparação dos derivados da histidina e da arginina onde a natureza
hidrofóbica são ampliadas pela sua esterificação com álcoois com as cadeias alquilicas de maior
comprimento, ou seja, metil, etil, butil, hexil e octil. As amostras do plasmídeo foram
carregadas nas matrizes cromatográficas, a fim de se alcançarem os respectivos padrões de
retenção e de se encontrar a dependência da interacção em diferentes forças iónicas.
Os resultados gerais mostraram que a introdução de pequenas cadeias alquilicas na arginina e na
histidina, tais como os ésteres metil e etil, induziu um aumento na retenção do plasmídio. No
entanto, cadeias alquilicas de maior comprimento não favoreceram a interacção, aquando da
utilização de tampões de eluição com baixa força iónica. É suposto que a complexidade do
ligando possa comprometer o acesso do plasmídeo aos sítios de ligação. Outros estudos ainda
estão em desenvolvimento a fim de caracterizarem as interacções induzidas pelos ligandos
modificados da histidina e da arginina.
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Cromatografia de afinidade Plasmídeos Aminoácidos histidina.
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Universidade da Beira Interior