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Sal quaternário de 2-metilbenzotiazole como ligando cromatográfico para a purificação de proteínas
| datacite.subject.fos | Engenharia e Tecnologia::Engenharia Química | |
| dc.contributor.advisor | Ramos, Susana Sofia | |
| dc.contributor.advisor | Almeida, Paulo Jorge da Silva | |
| dc.contributor.author | Alves, Liliana Preciosa Moreira | |
| dc.date.accessioned | 2018-06-28T11:30:45Z | |
| dc.date.available | 2018-06-28T11:30:45Z | |
| dc.date.issued | 2014-7-8 | |
| dc.date.submitted | 2014-6-19 | |
| dc.description.abstract | A cromatografia de afinidade é o método de purificação mais seletivo para proteínas e outras biomoléculas. O desenvolvimento de novos suportes cromatográficos tem sido um tema de grande importância e interesse por parte de investigadores de diferentes áreas, no intuito de encontrar um suporte ideal que reúna características tais como custos baixos, eficiência, reutilizabilidade e estabilidade física e química. O sal de 2-metilbenzotiazole utilizado neste trabalho é de síntese fácil, baixo custo e apresenta na sua estrutura um braço espaçador longo e um grupo carboxílico que transformam este ligando sintético potencialmente adequado para a imobilização numa matriz e para posteriores estudos cromatográficos. Foram estudados vários métodos de imobilização do ligando à matriz no sentido de avaliar qual o melhor método para a imobilização deste tipo de ligandos. Dentro destes, a esterificação de Steglich revelou ser o método mais eficaz na imobilização do sal de 2-metilbenzotiazole a uma matriz de Sepharose CL-6B. Foram sintetizados vários suportes com diferentes densidades de ligando. Os suportes assim obtidos foram quantitativa e qualitativamente caracterizados por microscopia eletrónica de varrimento, espetroscopia de raios-X por dispersão em energia e análise elementar. Adicionalmente, foram exploradas as interações de afinidade entre os suportes cromatográficos obtidos e várias proteínas modelo. Os melhores resultados foram obtidos utilizando o suporte com a menor densidade de ligando, ou seja, de 0,18 mmol de sal de 2-metilbenzotiazole/g de suporte cromatográfico, o qual permite separar a ribonuclease, a a-quimotripsina e a albumina de soro bovino a partir de uma mistura artificial de proteínas. A separação das três proteínas foi conseguida através da eluição por passos, com a diminuição gradual da concentração de sulfato de amónio no tampão de eluição. Estes estudos iniciais permitiram demonstrar o potencial da aplicabilidade de ligandos catiónicos, tais como os sais de 2-metilbenzotiazole, para separação e purificação de proteínas por meio de cromatografia de afinidade, revelando um comportamento cromatográfico distinto e com boa reprodutibilidade. | por |
| dc.description.abstract | The most selective purification method for proteins and other biomolecules is affinity chromatography. The development of new chromatographic supports, with optimal characteristics in terms of low cost, efficiency, reusability and physico-chemical stability, has been a topic of great importance. The 2-methylbenzothiazole salt used in this work is easy to synthesize at low-cost. The carboxyl groups and the long spacer arm present in its structure make this synthetic ligand potentially suitable for immobilization on a matrix and allow subsequent chromatographic studies. Several methods of ligand immobilization into a matrix were studied in order to evaluate the best method for the immobilization of such ligands. Among these, Steglich esterification was found to be the most effective method for the immobilization of the 2-methylbenzothiazole salt onto the Sepharose CL-6B matrix. Several supports with different ligand densities were synthesized. The obtained supports were qualitatively and quantitatively characterized by scanning electron microscopy, energy dispersive X-ray spectroscopy and elemental analysis. Additionally, the affinity interactions between the chromatographic supports and various model proteins were explored. The best results were achieved using a chromatography support with the lowest ligand density, i.e. 0.18 mmol of 2-methylbenzothiazole salt/g of chromatographic support, enabling to separate ribonuclease, a-chymotrypsin and bovine serum albumin from an artificial mixture. The separation of the three proteins was achieved by stepwise elution with decreasing gradient of ammonium sulphate in the elution buffer. These initial studies have demonstrated the potential applicability of cationic ligands, such as salts of 2-methylbenzothiazole, for separation and purification of proteins via affinity chromatography, revealing a distinct and reproducible chromatographic behavior. | eng |
| dc.identifier.tid | 201327201 | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.6/4798 | |
| dc.language.iso | por | por |
| dc.subject | Cromatografia de Afinidade | por |
| dc.subject | Esterificação de Steglich | por |
| dc.subject | Purificação de Proteínas | por |
| dc.subject | Sal de 2-Metilbenzotiazole | por |
| dc.title | Sal quaternário de 2-metilbenzotiazole como ligando cromatográfico para a purificação de proteínas | por |
| dc.type | master thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| rcaap.rights | openAccess | por |
| rcaap.type | masterThesis | por |
| thesis.degree.name | 2º Ciclo em Bioquímica | por |
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