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Nanosistema de entrega de fármacos para o tratamento de infeções por HPV
| datacite.subject.fos | Ciências Médicas::Ciências Biomédicas | por |
| dc.contributor.advisor | Cruz, Carla Patrícia Alves Freire Madeira | |
| dc.contributor.author | Antunes, Francisca Ferreira | |
| dc.date.accessioned | 2020-03-11T17:24:03Z | |
| dc.date.available | 2020-10-08T00:30:15Z | |
| dc.date.issued | 2018-11-06 | |
| dc.date.submitted | 2018-10-08 | |
| dc.description.abstract | O AS1411 é uma sequência de oligonucleótidos rica em guaninas e altamente polimórfica, apresentando uma ampla variedade de estruturas de G-quadruplex (G4). Este aptamero é seletivo para a nucleolina (NCL), uma proteína sobre-expressa em muitas células cancerosas e que se apresenta como um potencial alvo terapêutico. Devido à ligação à NCL, o aptamero G4 AS1411 pode ser internalizado por estas células. Embora o G4 AS1411 apresente um perfil de segurança e capacidade de induzir respostas em alguns pacientes, é importante melhorar a sua farmacologia e potência, de forma a proporcionar uma melhor eficácia. Deste modo, novos derivados do G4 AS1411, como o G4 AT11-B0, foram desenvolvidos. O uso de aptameros derivados do G4 AS1411 para fins terapêuticos requer a sua estabilização através da presença de ligandos. Macrociclos derivados de fenantrolina, como o [32]phen2N4 e [16]phenN2, e derivados de laranja de acridina, como o C8, C8-NH2, C5 e C3, são apresentados como potenciais ligandos do G4 AT11-B0. O objetivo deste trabalho é desenvolver nanosistemas conjugados G4 AT11-B0-ligandos e avaliar os seus efeitos in vitro na linha celular do cancro do colo do útero (HeLa) versus fibroblastos dérmicos humanos normais (NHDF). Estudos de estabilização e afinidade dos ligandos em relação ao G4 AT11-B0 foram realizados por espectroscopia de dicroísmo circular e de fluorescência. Os resultados revelaram alta afinidade e estabilização térmica dos ligandos [32]phen2N4 (KD = 2,1 x 10-7 M-1 ) e C8 (?Tm = 44,5 oC), respetivamente, em relação ao G4 AT11-B0. Os conjugados, os ligandos e o G4 AT11-B0 foram incubados em células HeLa e NHDF e posteriormente fez-se uma avaliação da citotoxicidade celular através do ensaio de MTT. Os conjugados G4 AT11-B0-C3 e G4 AT11-B0-C5 apresentaram as menores percentagens de viabilidade celular, 17 % e 10,7 %, respetivamente, nas células HeLa. No ensaio de microscopia de fluorescência confocal observou-se a internalização celular do conjugado G4 AT11-B0-C8. O presente trabalho relata a importância do uso de nanosistemas conjugados formados por derivados do G4 AS1411 e ligandos como agentes anticancerígenos, inibindo a proliferação de células cancerosas, com danos mínimos nas células saudáveis. | por |
| dc.description.abstract | AS1411 is a G-rich oligonucleotide sequence highly polymorphic, presenting a wide variety of G-quadruplex (G4) structures. This aptamer exhibits selectivity to nucleolin (NCL), a protein overexpressed in many tumour cells and which presents itself as a potential therapeutic target. Due to the binding to NCL, G4 AS1411 aptamer can be internalized by these cells. Although G4 AS1411 has a safety profile and ability to induce responses in some patients, it is important to improved pharmacology and potency for better efficacy. By this way, new G4 AS1411 derivatives aptamers, like G4 AT11-B0, have been developed. The use of G4 AS1411 derivatives aptamers for therapeutic purposes requires their stabilization with ligands. Phenanthroline macrocycles, such as [32]phen2N4 and [16]phenN2, and acridine orange derivatives, such as C8 ,C8-NH2, C5 and C3, are presented as potential binders of G4 AT11-B0. The aim of this study is to develop G4 AT11-B0-ligands conjugated nanosystems and evaluate their biological effects in human cervical cancer cell line (HeLa) versus normal human dermal fibroblasts (NHDF). In order to evaluate the stability and affinity of ligands to G4 AT11-B0, circular dichroism and fluorescence spectroscopy were performed. The results revealed high affinity and G4 thermal stabilization of [32]phen2N4 (KD = 2.1 x 10-7 M-1 ) and C8 (?Tm = 44.5 oC), respectively. The conjugated, ligands and G4 AT11-B0 were transfected into HeLa and NHDF and the cytotoxicity was assessed by MTT assay. The G4 AT11-B0-C3 and G4 AT11-B0-C5 conjugated showed low percentages of cellular viability, 17 % and 10.7 %, respectively, on HeLa. Confocal fluorescence microscopy revealed cellular uptake of the G4 AT11-B0–C8 conjugated. The present work reports the importance of using G4 AS1411 derivative-ligands conjugated nanosystems as anticancer agents, inhibiting the proliferation of cancer cells, with minimal damages on healthy cells. | eng |
| dc.identifier.tid | 202354091 | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.6/9994 | |
| dc.language.iso | por | por |
| dc.subject | At11-B0 | por |
| dc.subject | Cancro do Colo do Útero | por |
| dc.subject | Derivados do As1411 | por |
| dc.subject | G-Quadruplex | por |
| dc.subject | Ligandos | por |
| dc.subject | Nanosistema | por |
| dc.title | Nanosistema de entrega de fármacos para o tratamento de infeções por HPV | por |
| dc.type | master thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| rcaap.embargofct | Contém dados temporariamente confidenciais | por |
| rcaap.rights | openAccess | pt_PT |
| rcaap.type | masterThesis | por |
| thesis.degree.name | 2º Ciclo em Ciências Biomédicas | por |
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