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Propriedades biológicas de óleos essenciais de plantas aromáticas: avaliação do potencial desinfetante do óleo essencial de Thymus zygis contra Listeria monocytogenes
Publication . Sousa, Beatriz Fernandes; Ferreira, Susana Margarida Paraíso; Duarte, Ana Paula Coelho; Coimbra, Alexandra Teixeira
A contaminação de alimentos durante as etapas de produção e conservação, nomeadamente pelo contacto com superfícies, representa um risco significativo para a segurança dos alimentos. Esse risco é agravado pela presença de patógenos como Listeria monocytogenes, bactéria capaz de sobreviver em condições adversas e provocar listeriose. Nesse contexto, as plantas aromáticas, ricas em compostos bioativos, podem ser utilizadas frescas, secas ou na forma de óleos essenciais (OEs), apresentando propriedades bioativas relevantes, como atividade antimicrobiana. Esses OEs podem constituir alternativas naturais e seguras aos conservantes e desinfetantes químicos, contribuindo para a conservação e segurança dos alimentos. Thymus zygis é uma planta amplamente conhecida e utilizada na culinária, cujo OE apresenta atividades biológicas significativas. Considerando isto, este trabalho teve como objetivo principal investigar o potencial biológico de OEs provenientes de diversas plantas aromáticas, com atenção às suas propriedades antioxidantes, antimicrobianas e citotóxicas, bem como avaliar a eficácia do OE de T. zygis na redução de L. monocytogenes em suspensão, biofilmes, e em superfícies de aço inoxidável, visando a sua utilização como desinfetante natural. Sete OEs provenientes das plantas Murraya koenigii, Artemisia dracunculus, Carum carvi, Trigonella foenum-graecum, Zingiber officinale, Salvia lavandulifolia e Thymus mastichina, foram inicialmente avaliados quanto às suas propriedades antioxidantes, antimicrobianas e citotóxicas. Embora todos apresentassem forte atividade antioxidante, apenas o OE de T. foenum-graecum revelou baixa toxicidade para células humanas, enquanto os restantes se mostraram tóxicos e com reduzida ação antimicrobiana. Devido a estes resultados, o estudo concentrou-se no OE de T. zygis, analisando a sua eficácia como agente antimicrobiano e desinfetante. Constatou-se que tanto o OE quanto os seus compostos voláteis exerceram efeito bactericida sobre L. monocytogenes. Ensaios realizados segundo a norma EN 1276:2009 indicaram que o OE, na concentração de 2 µL/mL, apresentou atividade como desinfetante eficaz, enquanto a 1 µL/mL apenas foi eficaz em superfícies limpas, com aumento de atividade ao longo do tempo. Apesar de não atingir plenamente os critérios da norma EN 13697:2001, os resultados demonstram claramente o potencial do OE de T. zygis e dos seus compostos voláteis como agentes antimicrobianos em superfícies de contacto com alimentos, capazes de reduzir biofilmes formados por esta bactéria mesmo a baixas concentrações e em curtos períodos de exposição. Assim, pode-se concluir que OE de T. zygis demonstrou potencial para uso como desinfetante natural e agente anti-biofilme contra L. monocytogenes.
Ciliopathy in cholangiocytes of biliary atresia patients – association with ischemic cholangiopathy, patterns of ductular reaction and disease severity
Publication . Quelhas, Patrícia Alexandra Silveira ; Santos, Jorge Luiz dos; Vieira, Sandra Maria Gonçalves; Lusquinos, José Ignacio Verde
Biliary atresia (BA) is a rare neonatal cholangiopathy characterized by the progressive obstruction of the extrahepatic bile ducts, leading to cholestasis, liver fibrosis, and often the need for liver transplantation. Although affected infants appear clinically healthy at birth, laboratory evidence of cholestasis is already detectable. Despite advances in understanding the underlying pathophysiological mechanisms, the etiology of BA remains unclear, with proposed causes ranging from viral infections and immune dysregulation to genetic predispositions and vascular anomalies. Recent evidence suggests that hypoxia and primary cilia dysfunction in cholangiocytes may play a central role in BA pathogenesis, influencing cholangiopathy progression and clinical outcomes.
This thesis investigates the interplay between hypoxia—specifically, the activation of the hypoxia-inducible factor 1-alpha (HIF-1α) pathway in cholangiocyte nuclei (ischemic cholangiopathy)—and the morphological and functional alterations of primary cilia in cholangiocytes of BA patients. The methodological approach included immunohistochemical, immunofluorescence, and molecular analyses of liver samples obtained from patients undergoing portoenterostomy, detailed characterization of ciliary morphology using advanced digital imaging techniques, and correlation of these findings with clinical and laboratory parameters and post-operative outcomes, including native liver survival.
The results demonstrated increased nuclear HIF-1α expression in cholangiocytes of BA patients, particularly in areas near the peribiliary vascular plexus and progenitor cell niches. This activation was absent in liver samples from control patients with other neonatal cholestases (non-BA), suggesting a specific role of hypoxia in BA pathogenesis. Furthermore, gene expression analysis revealed the upregulation of molecular pathways related to ductular reaction, oxidative stress, and angiogenesis, reinforcing the hypothesis that hypoxia actively contributes to bile duct injury and tissue remodeling. These findings justify further studies focused on the mechanisms involved in HIF-1α activation and the clinical effects of hypoxia and/or oxidative stress on cholangiocytes.
Additionally, the characterization of primary cilia in cholangiocytes revealed significant structural alterations in BA patient samples. A reduction in ciliary length and a possible disruption in the transport of acetylated tubulin 4α—a key marker of ciliary stability— from the cytoplasm to the cilium was observed. These alterations were associated with worse clinical outcomes, including a significant reduction in native liver survival. Regarding the association between hypoxia and ciliopathy, the co-localization of HIF- 1α and TUBA4A in BA samples suggests an inverse relationship between HIF-1α positivity and the presence of primary cilia on the luminal membrane of cholangiocytes, both in the portal tract and other microanatomical regions of the liver. Quantitative analysis of ciliary characteristics showed that biliary cells without hypoxic features maintained primary cilia integrity, suggesting that hypoxia may negatively impact ciliary formation or maintenance. The correlation between HIF-1α activation and ciliary dysfunction implies that hypoxia not only promotes inflammation and fibrosis but also compromises the structural and functional integrity of primary cilia, exacerbating disease progression.
These findings offer new insights into the pathophysiological mechanisms underlying BA, suggesting that HIF-1α activation and ciliary dysfunction may serve as relevant biomarkers for prognosis and potential therapeutic targets. Identifying these molecular alterations not only facilitates the prediction of clinical outcomes but also opens avenues for innovative interventions aimed at modulating the hypoxic response and restoring ciliary function to improve liver survival and patient quality of life.
Overall, this work advances the understanding of the relationship between hypoxia, ciliary dysfunction, and cholangiopathy in BA, paving the way for new research directions to develop more effective diagnostic and therapeutic strategies that mitigate the effects of hypoxia and preserve liver function in pediatric patients with this condition.
Análise Comparativa entre os ensaios Freelite® e N-Latex® na Quantificação Sérica de Cadeias Leves Livres em doentes com Gamopatias Monoclonais
Publication . Francisco, Catarina Isabel Ribeiro Silva; Monteiro, Andreia Sofia dos Reis; Tomaz, Cândida Ascensão Teixeira
O Laboratório de Patologia Clínica do Centro Hospitalar Universitário da Cova da Beira (CHUCB), da Unidade Local de Saúde (ULS) Cova da Beira, constitui uma unidade especializada na recolha e análise de amostras biológicas com vista à obtenção de dados laboratoriais rigorosos, fundamentais para a formulação de diagnósticos e de estratégias terapêuticas. O presente trabalho descreve a atividade desenvolvida nas secções de Microbiologia, Hematologia e Imunoquímica, com especial ênfase na realização de um projeto de investigação na área da Imunoquímica. Nos últimos anos, o interesse clínico e científico relativamente às gamopatias monoclonais tem vindo a intensificar-se, refletindo a maior sensibilidade dos métodos de diagnóstico laboratorial e o aumento da sua prevalência, principalmente em populações envelhecidas. Estas patologias resultam da proliferação anómala de plasmócitos, responsáveis pela produção excessiva de imunoglobulinas monoclonais podendo manifestar-se de forma assintomática, como a Gamopatia Monoclonal de Significado Indeterminado, ou evoluir para doenças malignas, como o Mieloma Múltiplo. A sua deteção precoce e correta caracterização são fundamentais para uma adequada vigilância clínica e intervenção terapêutica atempada. Neste contexto, o presente projeto de investigação teve como objetivo a comparação analítica, dos métodos atualmente disponíveis no Laboratório de Patologia Clínica do Centro Hospitalar Universitário da Cova da Beira, para a quantificação de cadeias leves livres (CLL) no soro de doentes com gamopatias monoclonais. Foram avaliados o método Freelite® (The Binding Site), que utiliza anticorpos policlonais, e o método N Latex® (Siemens), baseado em anticorpos monoclonais. O estudo incluiu, para a análise estatística, resultados da quantificação das CLL em amostras de soro de 108 doentes, dos quais 64 eram do sexo masculino e 44 do sexo feminino, entre outubro de 2024 e abril de 2025, com idades compreendidas entre os 41 e 96 anos. Os dados foram estratificados por tipo de gamopatia monoclonal (Gamopatia Monoclonal de Significado Indeterminado IgM, Gamopatia Monoclonal de Significado Indeterminado não-IgM e Mieloma Múltiplo). Para a análise estatística utilizaram-se os métodos de regressão de Passing-Bablok, o coeficiente de Spearman, método de Bland-Altman e o coeficiente kappa de Cohen. Os resultados revelaram discrepâncias analíticas relevantes entre os métodos, com situações em que os valores de CLL foram classificados como normais por um método e patológicos pelo outro. A concordância entre os métodos foi globalmente fraca, com particular destaque para o subgrupo MGUS não-IgM, que apresentou as maiores divergências, especialmente na determinação da razão κ/λ. Apesar de limitações decorrentes do tamanho amostral em alguns subgrupos, os resultados obtidos foram consistentes com a literatura, tendo em conta as diferenças metodológicas. Os resultados evidenciaram uma fraca correlação e baixa concordância entre os dois métodos, sublinhando a não intercambialidade dos mesmos, alertando para potenciais implicações clínicas no diagnóstico, monitorização e decisões terapêuticas e no seguimento de doentes com gamopatias monoclonais.
Avaliação de novas combinações de fármacos em cancro do pulmão de não pequenas células
Publication . Valente, Fabiana Duarte; Sousa, Ângela Maria Almeida de; Santos, Adriana Oliveira dos
O cancro do pulmão de não pequenas células (CPNPC) continua a ser uma das principais causas de mortalidade oncológica, sendo a resistência adquirida aos inibidores da tirosina-quinase (TKIs) um dos maiores obstáculos à eficácia terapêutica. O osimertinib, TKI de terceira geração dirigido a mutações ativadoras do EGFR, é um exemplo de fármaco que apresenta eficácia clínica significativa, mas enfrenta limitações devido ao desenvolvimento de resistência. Paralelamente, a sinvastatina tem demonstrado, em investigação pré-clínica, propriedades antitumorais relevantes, incluindo indução de apoptose e modulação de vias de sinalização associadas à progressão tumoral. Neste contexto, a coentrega destes fármacos em lipossomas surge como uma estratégia inovadora a ser desenvolvida para aumentar a eficácia terapêutica e reduzir a toxicidade sistémica da sinvastatina. Neste estudo, foram desenvolvidas e caracterizadas formulações lipossomais contendo sinvastatina ou osimertinib. Ambas as formulações apresentaram diâmetro hidrodinâmico nanométrico (=90 nm), baixo índice de polidispersidade (PDI <0,2) e estabilidade físico-química adequada, garantindo consistência entre diferentes lotes. O método de encapsulamento revelou-se eficiente, com recuperações superiores a 80% para ambos os fármacos e eficácias de encapsulamento de aproximadamente de 100%. A avaliação da viabilidade celular revelou que a sinvastatina apresentou uma redução significativa do IC50 quando encapsulada em lipossomas (1,160 µM) comparativamente à forma livre (1,770 µM). O osimertinib mostrou uma diminuição ligeira do IC50 em lipossomas em relação à forma livre (0,02076 µM vs. 0,02569 µM). Notavelmente, a combinação dos dois fármacos induziu uma redução mais pronunciada do IC50 quando encapsulada em lipossomas (0,01562 µM) comparativamente à forma livre (0,1566 µM), evidenciando um efeito sinérgico significativo que supera a contribuição de cada fármaco isoladamente. Estes resultados sugerem que a encapsulação lipossomal potencia a eficácia antiproliferativa das combinações de sinvastatina e osimertinib na linha celular H1975. Estes resultados fornecem uma prova de conceito sólida para a utilização de lipossomas como veículos de coentrega de sinvastatina e osimertinib, evidenciando a sua aplicabilidade enquanto estratégia combinada no CPNPC. A abordagem demonstra potencial para maximizar a eficácia terapêutica, reduzir efeitos adversos e constituir uma base para futuros estudos pré-clínicos e clínicos.
Study of the bioaccessibility, biodisponibility and cytotoxicity of Salvia divinorum: method development and in vitro evaluation
Publication . Calado, Sara Agostinho; Alba, Maria Eugénia Gallardo; Duarte, Ana Paula Coelho; Pires, Bruno Miguel Pinheiro
Salvia divinorum is a psychoactive plant traditionally used in spiritual and medicinal contexts in Mexico, whose main active constituent is salvinorin A (SA). This diterpene exhibits a unique pharmacological profile, acting as a potent and selective agonist of the ?-opioid receptor, which distinguishes it from classical psychedelic substances. Due to these properties, the plant has attracted attention both as a recreational drug, particularly among young people in Europe and the United States, and within scientific research, given its potential therapeutic applications in the management of pain, depression, anxiety, and addiction. However, adverse effects and the absence of clear regulation raise toxicological concerns. The present study aimed to investigate the bioaccessibility and bioavailability of SA, with particular focus on absorption through the oral mucosa, one of the common routes of consumption. To this end, an in vitro model simulating the oral digestive process was developed, employing artificial saliva. Plant extraction was carried out from dried S. divinorum leaves, subjected to maceration and subsequent incubation with artificial saliva at 37 °C under agitation for 3 hours. The resulting extracts were analysed by highperformance liquid chromatography coupled to diode array detector (HPLC-DAD), confirming the presence of SA, but not its metabolite salvinorin B (SB). In parallel, human tongue carcinoma cells (UPCI:SCC154) were used to assess both permeability and cytotoxicity of the extract. The MTT assay revealed a dose- and timedependent effect, with reduced cell viability after prolonged exposures. The bioaccessibility assay further demonstrated that oral digestion markedly decreases the fraction of SA available for systemic absorption. The results confirmed that SA is effectively absorbed through the oral mucosa, accounting for the rapid and intense effects reported in the plant’s consumption. Nevertheless, a significant cytotoxic impact was also observed in cellular models, underscoring the need for caution in repeated or chronic use. From an analytical perspective, HPLC-DAD proved to be a robust technique for quantifying SA in complex matrices. In conclusion, S. divinorum combines considerable pharmacological potential with risks associated with uncontrolled use. The evidence gathered in this study highlights the need for further clinical investigations to evaluate safety and efficacy, as well as the development of formulations that could enable therapeutic applications of SA while minimising its adverse effects.