FC - DQ | Dissertações de Mestrado e Teses de Doutoramento
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- Influência das condições de cozimento sobre a estrutura da lenhina e a branqueabilidade da pasta kraft de Pinus pinasterPublication . Baptista, Cecília de Melo Correia; Duarte, Ana Paula CoelhoEste trabalho pretende contribuir para aumentar o conhecimento acerca das particularidades da pasta kraft crua de Pinus pinaster que é vista como sendo pouco competitiva com as suas congéneres do Norte da Europa, nomeadamente pela sua coloração mais escura. Os objectivos principais foram o estudo da estrutura da lenhina residual das pastas e da sua relação com o factor de reflectância das pastas e o estudo da aptidão das pastas cruas à deslenhificação com oxigénio e ao branqueamento. O trabalho foi dividido em 3 fases: 1. Influência do grau de deslenhificação na estrutura da lenhina residual e na coloração das pastas cruas. 2. Influência do processo de cozimento na estrutura da lenhina residual e na coloração das pastas cruas. 3. Branqueabilidade das pastas cruas e seu comportamento ao nível da aptidão à deslenhificação com oxigénio e face a diferentes sequências de branqueamento, nomeadamente ECF, TCF e ECF-light (ensaios às escalas laboratorial e piloto). As lenhinas residuais foram isoladas por hidrólise ácida em meio orgânico e as dissolvidas foram isoladas por precipitação do licor negro, em meio ácido. Foram caracterizadas por análise elementar, oxidação pelo permanganato com análise dos fragmentos oxidados por GC/MS, pirólise analítica, espectroscopia RMN do 13C e espectroscopia FTIR/PCA. Avaliou-se a contaminação em açúcares residuais por HPLC após hidrólise com TFA. Concluiu-se que, à medida que prossegue a deslenhificação, se acentua a falta de selectividade do processo kraft e aumenta o grau de condensação da lenhina, traduzido pela diminuição do factor de reflectância das pastas. Este processo influencia a estrutura da lenhina, nomeadamente a degradação da cadeia lateral, o conteúdo em grupos hidroxilo e em unidades condensadas. Ao comparar as pastas convencionais de P. pinaster e de P. sylvestris, verificou-se que as diferenças parecem dever-se à estrutura das lenhinas nativas. A coloração da pasta é influenciada pela estrutura da lenhina e pelo conteúdo em compostos extractáveis. A presença de surfactantes como aditivos de cozimento melhorou o processo de deslenhificação. Com esta tecnologia podem produzir-se pastas com índice Kappa mais baixo, melhor viscosidade intrínseca e factor de reflectância similar ao da pasta de pinheirosilvestre. Nestes cozimentos existe uma melhor penetração e difusão do licor e um uso mais eficiente dos reagentes de cozimento. A branqueabilidade não foi melhorada pelo uso de surfactantes. Contudo, esta modificação processual possibilitou a diminuição da quantidade de reagentes de branqueamento necessária, o que é interessante para a indústria, tanto do ponto de vista ambiental, como económico. Na deslenhificação com oxigénio, a pasta FTR alcançou o maior nível de deslenhificação final. As pastas produzidas na presença de surfactantes mostraram piores comportamentos do que a pasta kraft convencional. Este processo exibiu a menor despolimerização da celulose, a melhor selectividade do processo O1O2 e o maior incremento global do factor de reflectância. Os processos de branqueamento ECF e ECF-light produziram pastas idênticas quanto ao grau de brancura final (88% ISO) e às propriedades físico-mecânicas. A sequência ECF-light originou efluentes com COD superior, facto contrabalançado pelo teor significativamente inferior de AOX gerados. Assim, a pasta kraft de Pinus pinaster pode ser facilmente branqueada para utilização integrada. Contudo, a escolha do processo de branqueamento a utilizar deverá ser ponderada, quer em termos de metodologia de produção e suas implicações ambientais e económicas, quer quanto à utilização final da pasta.
- Estudo dos mecanismos implicados na vasorelaxação induzida pelos estrogénios na artéria umbilical humanaPublication . Marques, Bruno Joel dos Santos; Verde Lusquiños, José IgnacioA artéria umbilical humana (HUA) está envolvida na circulação fetoplacentária. Os mecanismos endócrinos e parácrinos, que regulam o estado contráctil das células musculares lisas, são muito importantes para uma óptima troca de gases e nutrientes entre o feto e a placenta, uma vez que os vasos sanguíneos umbilicais não são enervados. Estudos anteriores demonstraram que 17β-estradiol induz um relaxamento vascular da HUA, dependente da concentração de hormona adicionada, no entanto, o mecanismo vasorelaxante desta hormona ainda permanece por esclarecer. O efeito do 17β-estradiol na contractilidade desta artéria foi analisado. Foi investigado o mecanismo vasorelaxante do estradiol, e sua participação na actividade dos canais iónicos e dos nucleótidos cíclicos (AMPc e GMPc). Estes últimos, são os principais segundos mensageiros ligados à vasodilatação. São sintetizados por ciclases e degradados por diferentes tipos de fosfodiesterases (PDE’s). Usando uma técnica de banho de órgãos, os anéis de artérias umbilicais humanas (HUA) sem endotélio foram contraídos com seretonina (5-HT, 1 μ M), histamina (10 μ M) e cloreto de potássio (KCl, 60 mm). Foi observado que o 17β-estradiol, para a concentração máxima utilizada (100 μ M), induz um efeito vasorelaxante nas AUH, contraídas com 5-HT (34,3 ± 4,9%), histamina (55,9 ± 4,1%) e KCl 60 mM (51,4 ± 6,5%). A utilização de glibenclamida, um inibidor de canais de potássio dependentes de ATP (KATP), a 4-aminopiridina, um inibidor de canais de potássio dependentes de voltagem (Kv) e um inibidor de canais de potássio dependentes de cálcio (KCa), o tetraetilamonio (TEA), reduziu o efeito vasorelaxante do 17β-estradiol em HUA contraídas com histamina. Em artérias contraídas com KCl (60 mM) e 5-HT (1 μ M), apenas a 4-aminopiridina e a TEA, diminuíram o efeito do 17β-estradiol. Foi também observado, o efeito da nifedipina, um inibidor de canais de cálcio dependentes de voltagem tipo L. Foi observado que a sua adição não influenciou o efeito relaxante do 17β-estradiol nas artérias contraídas com 5-HT, histamina e KCl. Foi demonstrado, que a estimulação da guanilciclase, pelo ANP (péptido natriurético atrial), relaxa a AUH em contracções induzidas com a histamina e 5-HT. Isto indica que, o aumento intracelular do nucleótido cíclico, GMPc, leva à vasodilatação da artéria umbilical humana. Investigou-se também, o efeito da inibição de PDE´s nas artérias contraídas com 5-HT (1 μ M) e histamina (10 μ M). Demonstrou-se que o inibidor inespecífico das PDE’s, o IBMX (3-isobutyl-1-methylxanthine, 50 μ M) relaxou as AUH contraídas com histamina (49,9% ± 5,4) e 5-HT (20,7% ± 6,5), o que aumentou o efeito relaxante do ANP, quando as artérias são contraídas com histamina (72,5% ± 3.7). Por fim, analisamos o efeito dos inibidores da guanilciclase, ODQ (1H-[1,2,4]oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one, 30 μ M) e da adenilciclase, SQ (9-(Tetrahydro-2-furanyl)-9H-purin-6-amine,100 μM) em artérias contraídas com 5-HT (1 μ M) e histamina (10 μ M). Observamos uma diminuição do relaxamento provocado pelo estradiol quando estes inibidores foram utilizados. Em resumo, os nossos resultados demonstram que, o relaxamento induzido pelo 17β-estradiol é parcialmente mediado pela activação de canais de K+ e pelo bloqueio dos canais de Ca2+. O aumento dos níveis de GMPc induz o relaxamento do músculo liso vascular do cordão umbilical humano. As PDE’s estão envolvidas no relaxamento muscular mediado pelo ANP. O inibidor de guanilciclase reduz os efeitos relaxantes do 17β-estradiol em artérias contraídas com 5-HT (1 μ M) e com histamina (10 μ M).
- Detecção do bocavírus humano em crianças com infecção respiratóriaPublication . Pinhanços, Sandra Sofia Mimoso; Domingues, Fernanda da Conceição; Almeida, Sofia Isabel de AguiarAs infecções respiratórias são a principal causa de morbilidade e mortalidade em crianças, sobretudo nos meses de Inverno (Muñoz, 2006). Os vírus, nomeadamente, o vírus sincicial respiratório (VSR), o vírus parainfluenza (VPI), o rinovírus, o adenovirus (AD), o coronavírus, e os vírus influenza A (IA) e B (IB), são os principais responsáveis por este tipo de infecções (Kesebir et al., 2006). Apesar dos aspectos clínicos das doenças respiratórias serem facilmente reconhecidos, o agente etiológico responsável, muitas vezes não é identificado (Kahn, 2007). No entanto recentemente, com o uso de métodos de biologia molecular, têm sido descobertos vários agentes virais associados a infecções respiratórias, nomeadamente o metapneumovírus humano (MPvH), vários coronovírus, e por último o bocavírus humano (HBoV). O HBoV pertence à família Parvoviridae e foi descrito pela primeira vez em 2005, em Estocolmo, por T. Allander e sua equipa, que verificaram a presença do vírus em 17 num total de 540 amostras de crianças com infecção respiratória (Allander et al., 2005). Desde então, várias equipas de investigadores têm procurado estudar o seu papel nas infecções respiratórias.
- Aplicação de cromatografia de interacção hidrofóbica na separação dos alergénios do látex Hev b1 e Hev b3Publication . Fernandes, Nuno Miguel do Nascimento; Tomaz, Cândida Ascensão TeixeiraA alergia de proteínas de latex de borracha natural (NRL) é um problema que afecta especialmente pessoas que contactam frequentemente com as luvas de látex. De entre os grupos mais afectados, destacam-se os trabalhadores da área da saúde (TAS) e os doentes com espinha bífida (SBP). As luvas de látex possuem um grande número proteínas e péptidos, mas apenas alguns são alergénios que participam na alergia ao látex. Assim, proteínas com um alto grau de pureza são essenciais para desenvolver métodos de diagnóstico e estratégias de imunoterapia. Apesar das proteínas recombinantes poderem usadas nestas metodologias, nem todos os alergénios recombinantes foram ainda validados relativamente à sua aplicação clínica. Torna-se assim importante o estudo de novos métodos de purificação de alergénios a partir das suas fontes naturais. As características hidrofóbicas dos alergénios Hev b 1 e Hev b 3, alergénios “major” para os SBP, sugerem a possibilidade da sua purificação por cromatografia de interacção hidrofóbica (HIC). Assim, o objectivo principal deste trabalho aplicar a HIC na separação de estes alergénios a partir de diferentes amostras de NRL. Inicialmente, neste estudo foram obtidos extractos a partir de látex amoniado através de dois métodos diferentes. Os resultados da electroforese SDS-PAGE mostraram uma grande diversidade de proteínas, com diferentes pesos moleculares, entre os dois processos de extracção, nomeadamente na concentração de Hev b 3. Os extractos de latex não amoniado foram usados sem qualquer tratamento. A HIC foi realizada usando uma coluna de epoxi-Sepharose com diferentes concentrações de sulfato de amónio no eluente. As fracções recolhidas foram analisadas por SDS-PAGE (12,5%) e por ELISA. Embora os resultados mostrem um fraccionamento de diferentes proteínas do latex amoniado, não foi observada uma separação selectiva do Hev b 1 e Hev b 3. Uma possível explicação, pode ter a ver com a baixa concentração de Hev b 3 na amostra e a complexidade dos métodos de extracção. A HIC da amostra de latex não amoniado mostrou uma separação selectiva de uma proteína com aproximadamente 14 Kilodalton (KDa) que pode corresponder ao Hev b 1, no entanto a identificação inequívoca desta proteína não foi conseguida. Os resultados obtidos, apesar de preliminares, mostram a possibilidade de aplicação da HIC num passo único na purificação de alergénios do látex a partir de látex não amoniado.
- Desenvolvimento de processos de recuperação de plasmídeosPublication . Matos, Tiago Manuel Batista; Queiroz, João António de Sampaio RodriguesGene therapy is a revolutionary technique that consists in direct manipulation of the individual genetic material. DNA vaccines are based on the insertion of bacterial plasmids that are designed to express a gene into a host cell. Plasmid DNA has been used for a long time in molecular biology as a convenient mean for genetically modified living organisms. Typically amounts of DNA are needed in such operations and the methodology developed for producing and purifying the plasmid DNA has been developed accordingly. This is especially important in the safer, but less efficient non-viral gene therapy, where large amounts of plasmid DNA are required. Plasmid DNA intended for use in humans should essentially be free of genomic DNA, RNA, endotoxins, and proteins from the host cell, but also from adventitious agents such as bacteria and fungi. In addition, the plasmid vector should preferably be in the supercoiled topoisomeric form, which is a more effective transfection agent than the open-circular, linear, multimeric, or partially denatured isoforms. One very important step in any plasmid production process, after fermentation/cell harvest, is cell lysis. During this step the bacteria are broken up and intracellular components are released. Lysis is, therefore, crucial to the production as it determines both the amount of bacterial plasmid DNA actually entering the downstream process and the difficulty of the subsequent purification via the complexity of the feed matrix, i.e., the amount and type of co-released impurities. The selection of the cell lysis process, among the many that exist, depends on the purpose and type of microorganism to which it will be applied. The cell lysis processes, particularly the chemical and enzymatic, have been developed to minimize possible adverse effects that could occur to pDNA. In this work 5 different types of reported methods (Alkaline Lysis, Osmotic shock Lysis, Non Enzymatic Thermal Shock, Electrical Cell Lysis and non Alkaline) as well as a newly developed process of plasmid recovery were studied and compared in terms of their profitability.
- Síntese e caracterização de nanocobaltites para aplicação em substratos têxteis: estudo da aplicabilidade fotoquímica em suportes têxteisPublication . Soares, Sandra Cristina Nunes; Santos, Amélia Rute de Lima Dias dosA contaminação ambiental é um problema em expansão que não pode ser negligenciado, uma vez que influencia todo o planeta e a nossa vida diária. A eliminação de compostos contaminados reflecte-se em custos de energia. A indústria têxtil produz uma grande quantidade de efluentes podendo, deste modo, causar sérios problemas ambientais, devido ao facto de os efluentes conterem compostos corados, que são resultado de corantes não fixos a fibras durante os processos de tingimento. Têm sido investigadas novas tecnologias, quer para a degradação ou imobilização de contaminantes. Uma delas é a fotocatálise heterogénea, a qual faz parte dos Processos de Oxidação Avançados (POA). O desenvolvimento de novos produtos de vestuário baseados na imobilização de nanopartículas em fibras têxteis tem despertado grande interesse por parte do sector académico e industrial. Actualmente, uma vasta gama de nanopartículas e nanoestruturas podem ser imobilizadas em fibras, proporcionando, deste modo, a produção de superfícies altamente activas que podem adquirir propriedades de bloqueio UV, anti-bacterianas, auto-limpeza, entre outras. Este trabalho teve como finalidade preparar, sintetizar e caracterizar materiais com granulometria muito fina, se possível na escala nano. As propriedades de superfície, assim como as microestruturas destes pós, que controlam a maioria dos parâmetros requeridos para aplicações específicas, dependem em grande maioria do método de preparação, que vai determinar a morfologia dos produtos finais e o número e tipo de fases cristalográficas. As amostras em estudo foram preparadas pelo método de coprecipitação e maturação em sistema fechado, utilizando cloreto de cobalto (II) hexahidratado, cloreto de ferro (II) tetrahidratado, cloreto de cobre (II) dihidratado, cloreto de zinco (II) como percursores de iões metálicos. Os resultados dos sólidos cristalinos foram caracterizados por DRX, IV e MEV.
- Aplicação de antibióticos como ligandos em cromatografia de afinidade para purificação de DNA plasmídicoPublication . Nunes, Catarina Caramelo; Tomaz, Cândida Ascensão Teixeira; Marcos, João Carlos Ramos NunesAs Terapias Moleculares, como a Terapia Génica e as Vacinas de DNA, estão a criar um aumento da procura de grandes quantidades de DNA plasmídico (pDNA) puro. Apesar de já estarem disponíveis vários métodos, baseados em protocolos da biologia molecular, para a purificação de plasmídeos, a grande maioria não são apropriados para o uso em larga escala. Para além disso, esses protocolos usam com frequência reagentes tóxicos, os quais impedem a sua utilização para a purificação de produtos terapêuticos. Já os métodos baseados na afinidade usados até agora, parecem ser bastante promissores, contudo a maior parte faz uso de macrobiomoléculas de preços elevados, que impedem a sua utilização extensiva. Sabe-se que são várias as moléculas que ligam ao DNA com uma especificidade elevada, como certos antibióticos e agentes anticancerigenos. É o caso das moléculas focadas neste estudo: a neomicina e a berberina. Desta forma, estes ligandos representam uma boa alternativa para a aplicação a protocolos de purificação por afinidade. Tendo esse objectivo em mente, as afinidades de ligação entre as moléculas acima mencionadas e um pDNA modelo (pVax1LacZ), foram avaliadas, recorrendo à técnica de titulação fluorimétrica desenvolvida por Strothkamp. A titulação do pDNA com brometo de etídio (BrEt) foi seguida através da intensidade de fluorescência, na ausência e presença de diferentes concentrações dos ligandos em estudo. Aos dados obtidos foi aplicado o método de Scatchard, para assim se determinar o efeito de cada um dos compostos na ligação do BrEt ao pDNA. As constantes de ligação de cada composto foram depois calculadas para diferentes concentrações de cloreto de sódio. Os resultados obtidos mostram que o antibiótico que apresenta a constante de afinidade mais elevada é a berberina, a uma concentração de cloreto de sódio 1,0 M, podendo assim ser um ligando promissor para a purificação de pDNA por afinidade. O suporte escolhido para os ensaios de cromatografia de afinidade foi o Epóxi – (CH2)4 – Sepharose™, contudo a berberina não contém grupos hidroxílicos funcionais para poder ser directamente imobilizada. Desta forma, foram realizados estudos visando a clivagem do seu grupo metilenodióxido para a obtenção de um catecol, alcançando-se os melhores resultados através do uso de tricloreto de alumínio, como activador. Porém, em vez de um único composto, foi obtida uma mistura de quatro produtos, derivados da hidrólise dos grupos metóxido. Ainda assim, procedeu-se à imobilização da mistura ao suporte e analisou-se a interacção do gel obtido com o pDNA. Estudou-se também a influência da concentração de sal no perfil cromatográfico. Os resultados obtidos mostram que, para todas as concentrações de sal, a amostra foi imediatamente eluída após a injecção, sem qualquer retenção na coluna. Este pode ter sido consequência de uma possível baixa densidade de ligandos na coluna ou ao facto da constante de afinidade calculada não representar a verdadeira afinidade existente entre a berberina e o pDNA. O facto de a derivatização ter sido realizada com quatro compostos diferentes, pode também ter sido responsável pela má retenção. Uma vez que esta foi a primeira vez que um antibiótico foi usado como ligando para a purificação de pDNA, criou-se um campo de investigação promissor e pouco explorado, que poderá melhorar e simplificar os protocolos já existentes, para além de, num futuro próximo, poder ser usado para implementar esta abordagem cromatográfica à purificação, em larga escala, de vectores plasmídicos para serem usados nas terapias moleculares.
- Avaliação da adesão e viabilidade celular em hidrogéis baseados no dextrano oxidadoPublication . Coelho, Sílvia Cláudia Gomes; Correia, Ilídio Joaquim SobreiraHidrogéis injectáveis iniciadores livres são muito importantes para aplicações na engenharia dos tecidos e medicina regenerativa, nomeadamente na entrega de drogas e/ou células, desde que eles possam ser administrados de um modo invasivo mínimo, sem recorrer a iniciadores químicos que poderiam ser prejudiciais. Os diferentes materiais utilizados nestas áreas são designados por biomateriais e poderão ser futuramente utilizados no tratamento clínico de danos em tecidos humanos, com o benefício de regenerar os defeitos do corpo pelo próprio tecido hospedeiro. Os biomateriais podem também servir como estruturas tridimensionais que suportam o crescimento celular. O objectivo do presente trabalho de investigação foi avaliar a adesão e viabilidade celular em hidrogeís baseados no dextrano oxidado (dexOx) ligado com o ácido adípico dihidrazida (AAD) e/ou gelatina para futura aplicação destes biomateriais em substitutos de vasos sanguíneos. As placas de cultura contendo os biomateriais foram fornecidas pelo Departamento de Engenharia Química da Universidade de Coimbra. A construção eficiente de substitutos de vasos sanguíneos humanos é fortemente dependente do uso de células endoteliais viáveis e completamente funcionais. Inicialmente foram isoladas células endoteliais a partir das artérias do cordão umbilical humano, para se realizarem ensaios de biocompatibilidade nos biomateriais em estudo pelo método MTT. A presença das células endoteliais que expressam o factor von Willebrande e CD144 foi confirmada por imunofluorescência. Ao longo do presente projecto de investigação houve alguma dificuldade em isolar as células endoteliais humanas. Assim, e visto ser necessário um grande número de células para realizar os ensaios de biocompatibilidade, os ensaios MTT foram realizados com células endoteliais da córnea de coelho e com células de músculo liso humanas das artérias umbilicais. As diferentes formulações do dexOx reticulados com AAD e/ou gelatina foram dissolvidas em PBS ou em meio de cultura apropriado para cada tipo de células usadas. Os grupos aldeído presentes no dextrano oxidado reagem com o grupo hidrazida do agente reticulante AAD, aumentando os grupos hidroxilo que vão facilitar a adesão celular ao dextrano. A gelatina foi usada como agente de estabilização dos biomaterais. Os hidrogéis dissolvidos em meio de cultura e com baixo grau de oxidação promoveram adesão e crescimento celular. A viabilidade celular foi acima do controle positivo para todos os graus de oxidação do dextrano. Baseado nos resultados obtidos, estudos futuros serão realizados para estudar a aplicação do dextrano oxidado na preparação de substitutos de vasos sanguíneos.
- Small-molecule boron compounds to use against interleukin-23Publication . Antunes, Joana Alexandra Pereira; Tomaz, Cândida Ascensão Teixeira; Freund, YvonneAnacor Pharmaceutical’s core technology platform is based on the use of boron chemistry to develop novel therapies. Boron-based compounds have a unique geometry that allows them to have two distinct shapes, giving boron-based drugs the ability to interact with biological targets in novel ways and to address targets not amenable to intervention by traditional, carbon-based compounds. Boron’s reactivity allows boronbased compounds to interact with a biological target that is specific to a particular disease or condition and create a change in that target. The anti-inflammatory properties of some Anacor compounds merged with research in the etiology of psoriasis could improve this pathological condition. Initially the origin of psoriasis was attributed to keratinocytes, but nowadays is a known fact that it’s the close relationship between those cells and several others immune cells that creates the symptoms and typical lesions of this pathology – well-demarcated erythematous, scaly plaques with epidermal hyperplasia (acanthosis) accompanied by parakeratosis. Analysis of the cell infiltrates as well as the type of cytokines and chemokines present in the psoriatic lesions, first lead researchers to believe that this was either a T helper 1 (TH1) disease (due to the high levels of Interleukin-12 (IL-12) and Interferon-γ (IFN-γ) and CD4+ cells) or an autoimmune disease (where the immune system would auto-react against own keratinocytes). With the discovery of a novel cytokine – Interleukin-23 (IL- 23) - that shares the p40 subunit with IL-12 and also the IL-12Rβ1 receptor, but not the IL-23R, a new possible path was initiated. Unlike IL-12, the new discovered cytokine – IL-23 does not act on naïve T cells, but it does act on memory T cells. The IL-12 initially found in psoriatic lesions is actually IL-23 and a relationship was build between this and another cytokine – Interleukin -17 (IL-17). Further research lead to the findings of a CD4+ subset that produces IL-17 (and other important cytokines) which was then designated T helper 17 (TH17). IL-23 is responsible for maintaining the growth of this subset of immune cells and both IL-23 and TH17 were implicated in psoriasis. Due to the structural similarity with IL-12, it was thought that the same inhibitory mechanisms that inhibit IL-12 could also inhibit IL-23 production. Phosphodiesterase 4 (PDE4) is the major cyclic AMP (cAMP)-metabolizing enzyme found in inflammatory and immune cells. Therefore and since there’s a wide range of cytokines whose production is inhibited by PDE4 inhibitors, Structure Activity Relationship (SAR) was built having IL-23 inhibition data along with PDE4 inhibition data for Anacor compounds and commercially available compounds known to inhibit PDE4 (i.e. Rolipram, Ibudilast and others). The present work shows that the PDE4 inhibition does not correlate with IL-23 inhibition, not just by the fact that there are several compounds that inhibit the cytokine but not the enzyme and the other way around, but also because the commercially available compounds known to inhibit the PDE4 do not inhibit IL-23 production. Investigating further on and continue to look for IL-23 inhibition by structurally different chemical compounds synthesized as well as trying to understand the pathways by which IL-23 is produced would hopefully in the future increase the amount of information available about this cytokine regulation.
- Desenvolvimento de biomateriais para futura aplicação em medicina regenerativaPublication . Lavrador, Isabel Ferreira; Correia, Ilídio Joaquim SobreiraA engenharia dos tecidos utiliza diferentes métodos e materiais para tentar obter estruturas com propriedades semelhantes aos tecidos que existem no organismo. Para isso utiliza diferentes materiais que são designados por biomateriais, contribuindo significativamente para diversos avanços no campo da Medicina Regenerativa. Estes têm como função reparar, substituir, manter ou melhorar a função particular de um tecido ou órgão. O presente projecto de investigação teve como objectivo avaliar a adesão celular e a viabilidade de hidrogéis tendo como base o dextrano oxidado, para posterior aplicação na medicina regenerativa, principalmente na produção de substitutos de vasos sanguíneos. Para isso procedeu-se inicialmente ao isolamento de células de músculo liso humanas, para posterior realização de ensaios de biocompatibilidade de vários hidrogéis com diferentes formulações de dextrano oxidado ligado aos agentes reticulantes ácido adipidico dihidrazido (AAD) e/ou gelatina (Gel) dissolvidos em DMEM-F12 ou em PBS. Estes biomateriais foram fornecidos pelo Departamento de Engenharia Química da Universidade de Coimbra. A presença das células de músculo lisas humanas na cultura primária foi confirmada por imunofluorescência com sinal positivo para a proteína de alfa - actina. Porém os primeiros ensaios de biocompatibilidade foram realizados com células de músculo liso de rato (A7r5) devido ao rápido crescimento destas células. E também de modo a proceder à optimização do método do MTT que foi realizado de modo a testar a citotoxicidade das várias formulações de dextrano. Ao longo deste estudo adicionou-se as células A7r5 e as células de músculo liso humanas aos diferentes hidrogéis, observou-se para os dois tipos de células de músculo liso que existe uma maior adesão e crescimento celular para as formulações de grau de oxidação inferior de dextrano, sendo o dextrano oxidado 5% (DexOx 5%) onde se obtiveram os melhores resultados. Assim como se observou maior adesão quando os materiais foram dissolvidos em DMEM-F12 em comparação aos dissolvidos em PBS. Os resultados obtidos fornecem novos dados importantes sobre a biocompatibilidade de hidrogéis tendo como base o dextrano oxidado para que, após futuros ensaios in vivo possam, num futuro próximo, ser utilizados na medicina regenerativa, na formação de substitutos de vasos sanguíneos