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- Andaimes bioativos produzidos por impressão 3D para aplicação na regeneração ósseaPublication . Cabral, Cátia Solange Duarte; Correia, Ilídio Joaquim Sobreira; Miguel, Sónia Alexandra PereiraThe incidence of bone disorders affecting the worldwide population has been presenting a steeply upward and it is expected to double by 2020, especially in populations where aging is associated with increased obesity and poor physical activity. The treatment of these types of disorders have been performed using bone grafts. However, these approaches have several limitations such as limited availability, induction of chronic pain to the patient as well as immune rejection. To surpass these limitations, researchers from Tissue Engineering area have been developing 3D structures, known as scaffolds, that are able to reproduce the mechanical and biological features of the native bone, as well as to promote the bone regenerative process. Among the techniques usually used for the production of these scaffolds, rapid prototyping techniques have been the most applied since they allow the production of structures with defined geometry and sizes. In addition, different types of materials (ceramics/polymers), have been selected to produce scaffolds that are able to mimic the inorganic/organic matrices of native bone. In order to improve the mechanical and osteogenic properties of the scaffolds, the researchers recently have incorporated graphene-derived materials into scaffolds structure. Reduced graphene oxide (rGO) possess great compressive strength and higher capacity to promote the calcium deposition at its surface, in comparison with graphene oxide (GO). However, rGO exhibits a lower stability in aqueous solutions, which impair its direct incorporation into ceramic/polymer mixture used for scaffolds production. The present work aimed to develop new 3D scaffolds functionalized with rGO. To accomplish that, the scaffolds composed by tricalcium phosphate, chitosan and gelatin (TGC) and graphene oxide (TGC_GO) were produced using a Fab@Home 3D-Plotter. After that, the scaffolds were functionalized with rGO through in situ reduction process, using the L-Ascorbic acid as reducing agent, obtaining TGC_irGO scaffolds. The results obtained revealed that the TGC_irGO scaffolds present enhanced mechanical properties without compromising their porosity. Moreover, the TGC_irGO scaffolds display an improved calcium deposit at their surface and were able to increase the alkaline phosphatase (ALP) activity. In addition, scaffolds also inhibited the microorganism’ growth, without compromising the viability and proliferation of osteoblasts. Such features reveal the potential of the TGC_irGO scaffolds for bone tissue regeneration applications as well as validate the protocol employed to functionalize the scaffolds.
- Determination of new psychoactive substances in forensic samples by gas chromatography coupled to mass spectrometryPublication . Almeida, Pedro Rafael Gonçalves de; Margalho, Cláudia Isabel Reis; Alba, Maria Eugénia GallardoThe term “new” for new psychoactive substances does not only refers to the newly synthesized compounds, but also to the ones used in an inappropriate way. These substances are produced to mimic the effects of the already controlled substances, like cocaine and amphetamine and despite the efforts to reduce their appearance, with the easy access to information and purchase, their presence in the streets had an alarming increase. For this work, it was developed and validated an analytical methodology to determine a group of eight synthetic cathinones (cathinone, flephedrone, buphedrone, a-PVP, methylone, ethylone, pentylone and MDPV) and three phenethylamines (4-MTA, 2C-P and dragonFLY). It was used blood as a biological matrix and deutered internal standards (amphetamine-d6, methamphetamine-d9, 3,4-methylenedioxymethamphetamine-d5, 3,4-Methylenedioxy-Nethylamphetamine-d5 and N-Methyl-1-(1,3-benzodioxol-5-yl)-2-butanamine-d5). The preparation of the sample consisted in a mixed-mode solid phase extraction followed by a fast derivatization process utilizing a microwave and the N-Methyl-bis(trifluoroacetamide) as the derivatization reagent, and the extracts were then analysed by gas chromatography-mass spectrometry operating in electron ionization mode analysis. The procedure was validated following the Scientific Working Group of Forensic Toxicology guidelines and the parameters studied were selectivity, linearity, limits of detection and quantification, intra- and interday precision and trueness, extraction efficiency and stability. The methodology presented linearity between 5-500 ng/mL for cathinone, buphedrone, 4-MTA, methylone, 2C-P and dragonFLY, 10-500 ng/mL for flephedrone, ethylone, pentylone and MDPV and 40-500 ng/mL for a-PVP, with determination coefficients above 0.99 for all substances. The limits of detection and quantification ranged between 5 ng/mL and 40 ng/mL, depending on the substance. For intra-day and interday precision the values of coefficient of variations varied between 1.1 and 8.6% and extraction efficiencies ranged from 70.3 to 116.6%. The method was subsequently applied to more than one hundred authentic samples of the Laboratory of Chemistry and Forensic Toxicology, Centre Branch, of the National Institute of Legal Medicine and Forensic Sciences, Portugal.
- Proteção de dados e o novo regulamento geral da União EuropeiaPublication . Simões, José Augusto RodriguesA 25 de maio de 2018 entrou em vigor na União Europeia o novo Regulamento Geral de Proteção de Dados, que substitui a anterior Diretiva europeia e a legislação nacional de proteção de dados.
- Reavaliação e Formação de um Painel de Provadores na FRULACTPublication . Silva, Ana Sofia Ferreira Alves Marques da; Peres, Maria de Fátima Pratas; Domingues, Fernanda da Conceição; Guerra, Antero PantaA análise sensorial é uma ciência que usa os sentidos humanos visão, paladar, olfato, tato e audição como um instrumento de medida para avaliar as características ou atributos de um produto, sendo uma metodologia utilizada na indústria alimentar, quer no controlo de qualidade, quer no desenvolvimento de novos produtos. A Frulact, uma empresa que atua no setor agro-industrial e que estimula processos e metodologias inovadoras, pretendia reformular o seu painel de análise sensorial e propôs a elaboração do presente trabalho. Assim, o presente trabalho teve como objetivos auxiliar a Frulact na construção de um espaço adequado para a realização de provas organoléticas e recrutar, selecionar e treinar provadores para constituir um painel de provadores para avaliar os produtos produzidos na sua fábrica do Tortosendo. Nesse sentido, procedeu-se a um recrutamento interno num total de 44 provadores, 21 mulheres e 23 homens, que apresentavam idades compreendidas entre os 23 e os 50 anos, pertencendo a vários sectores da fábrica. Os provadores recrutados foram submetidos a diversos testes nomeadamente: Ishihara, de estímulo, de discriminação de soluções de gostos básicos, de ordenação de intensidades e de discriminação de aromas. Após a realização de todos os testes mencionados foram selecionados 30 provadores para passarem para a fase de treino e integrarem o painel de análise sensorial da Frulact. Devido ao avultado número de amostras para avaliar, optou-se por formar cinco painéis constituído por seis pessoas cada um, constituindo três momentos de prova de acordo com os turnos fabris.
- Production and Purification of pre-miRNA-149 with potential application in diagnosis of prostate cancerPublication . Martins, Henrique Samuel Ramos; Cruz, Carla Patrícia Alves Freire Madeira; Sousa, Fani Pereira deA few years ago, was discovered that the lin-4 gene did not encode a protein, but a small RNA, responsible for regulating the expression of the LIN-14 protein in Caenorhabditis elegans. This promotes the study of a new class of biomolecules, the non-coding RNAs (ncRNAs), which include the microRNAs (miRNAs). Among them, the miRNA-149 is particularly relevant in the several cellular processes, including oncogenic regulators. Another particularity of this molecule is that the precursor (pre-miRNA-149) have a G-rich sequence, which forms a special nucleic acid secondary structure called G-quadruplex (G4) with a parallel topology that allows its recognition by nucleolin (an important nucleolar protein). This structure has been associated to the regulation of many cellular processes, such as, telomere maintenance, replication, transcription and translation. The present work describes the production and purification of pre-miRNA-149 in E. coli DH5a. For that purpose, a pre-miRNA-149 DNA sequence was cloned into a pBHSR1-RM plasmid and inserted within the previous competent cells by thermic shock. After fermentation, total RNA was and purified by affinity chromatography taking advantage of the biological recognition of pre-miRNA-149. Three affinity supports are used such as naphthalene amine Sepharose, Ltyrosine Sepharose and L-lysine Sepharose. Each of them has already been successfully used to purify similar biomolecules. The eluted fractions are evaluated by denaturing PAGE. The complete isolation of pre-miRNA-149 was not achieved in the three supports tested; however, some promising results were obtained with the L-lysine support, where a small portion of pre-miRNA-149 was isolated into one single fraction (low recovery rate), with a decreasing stepwise gradient from 2.05 M to 0.1 M of (NH4)2SO4 in Tris 10 mM (pH 6.0). Future affinity chromatography experiments are required to optimize the conditions to separate the pre-miRNA-149 from the total RNA mixture, to successfully use miRNA-based therapies.
- O impacto do stress oxidativo e dos sistemas redox na maláriaPublication . Miguel, Olavo Patrício de Almeida; Mendonça, António José Geraldes deA malária é um problema de saúde pública, significativo em mais de 100 países e gera cerca de 214 milhões de novas infeções por ano. Apesar do esforço significativo para erradicar essa doença perigosa, a falta de conhecimento sobre a sua fisiopatologia compromete o sucesso para a sua erradicação. Os parasitas protozoários do género Plasmodium, responsáveis por causar malária são extremamente recetivos ao stress oxidativo durante sua fase de vida intraeritrocítica, pois devoram a hemoglobina dentro de seus vacúolos e geram porções de heme tóxico e espécies reativas de oxigénio EROs. As espécies reativas de oxigênio (ERO) e nitrogênio (ERN) estão associadas ao stress oxidativo em muitas doenças e nas complicações sistêmicas originadas pela malária. A infeção por malária provoca a formação de radicais hidroxilo (•OH), que é a principal razão para a indução de stress oxidativo e apoptose. As moléculas redox e o NO desempenham diversas funções no parasita e no hospedeiro mais concretamente no mecanismo de defesa do hospedeiro contra uma variedade de parasitas e infeções por protozoários, incluindo o Plasmodium. O objetivo deste trabalho consubstanciou-se em analisar o impacto do stress oxidativo e dos sistemas redox biológicos na Malária, com uma breve incursão sobre os potenciais benefícios do uso de suplementos antioxidantes de origem sintética ou natural como uma estratégia antimalárica adjuvante.
- Análise do ensino da Fisiologia na Faculdade de Medicina da Universidade Mandume Ya NdemufayoPublication . Matondo, Kama Sandra; Neto, Isabel Maria FernandesO ensino da disciplina de Fisiologia não é igual em todo mundo, mas a sua complexidade e dificuldade são comumente constatadas pelos alunos, os quais reconhecem a sua importância para as suas carreiras futuras. O objetivo geral desta dissertação é analisar o ensino da Fisiologia na Faculdade de Medicina da Universidade Mandume Ya Ndemufayo, o que contribui para perceber se as competências que devem ser desenvolvidas na disciplina a fim de cooperar para a formação do perfil do futuro médico, estão patentes nos alunos que em breve estarão a exercer a profissão. Trata-se de um estudo observacional descritivo, em que foram analisados o plano curricular da disciplina, os resultados académicos dos alunos no período de 2011-2017. Foi realizado um teste de retenção de conhecimentos aos alunos do 6º ano no ano letivos de 2018. Os resultados encontrados revelaram algumas fragilidades a nível do plano curricular da disciplina. Verificou-se que há uma elevada percentagem de reprovação e, maioritariamente, os alunos que aprovam na disciplina têm notas entre 10 e 13 valores. Os alunos apresentaram uma perda de cerca de 93,2% do conhecimento obtido na disciplina de Fisiologia. O contexto educativo da Faculdade de Medicina é recente e enfrenta grandes desafios a fim de dar resposta as necessidades da comunidade. É necessário que o ensino da Fisiologia na formação do médico geral esteja centrado no aluno, desenvolvendo-se num contexto educativo que promova a integração, e que haja uma transferência efetiva dos conhecimentos da disciplina à prática clínica, contribuindo para a formação de um profissional da saúde integral e com qualidade.
- Molecular Modelling of a novel G-quadruplex structure and its interaction with ligandsPublication . Carrilho, Rui Pedro Abrantes; Cruz, Carla Patrícia Alves Freire Madeira; Sousa, Fani Pereira deDNA can exist under many different forms. Lately, G-quadruplexes, which are one example of the non-canonical DNA forms, have been getting a lot of attention due to the role they play in certain biological processes and as potential targets for therapeutic interventions. For example, these structures can exist in certain parts of the telomeres, structures responsible for cell replication. In cancer cells, if the enzyme telomerase could be inhibited, by inducing the formation of a G-quadruplex structure in guanine-rich telomere sequences, the spread of cancer cells would cease. For this and other reasons, it becomes important to be able to induce the formation of G-quadruplex structures and/or stabilize them, and one of the ways of doing so consists of targeting these sequences with ligands that have good affinity to G-quadruplex structures. However, few G-quadruplex ligands demonstrated the needed properties to fulfill the clinical needs, and further efforts to determine which would be better suited to target any particular sequence are needed. This work aimed at comparing the affinity to the pre-miR-149 G-quadruplex structure of seven promising ligands found in the literature, through the latest techniques fit for that purpose. The seven ligands tested were: [16]phenN2, [32]phen2N4, phen-DC3, pyridostatin, acridine orange derivatives C8 and C8-NH2 and L-arginine. Firstly, they underwent computational tests, with the molecular structure of the quadruplex and the ligand being simulated, and their optimal binding site and conformation found. Their binding energies were compared, and they underwent molecular dynamics runs to simulate their behavior in an environment with solvent, followed by another binding energy comparison. The trend obtained in order of decreasing binding affinity was: pyridostatin > [32]phen2N4 > [16]phenN2 > Phen-DC3 > L-arginine > C8 > C8-NH2. Biophysical techniques were then performed, to determine the binding affinities experimentally. First, circular dichroism spectroscopy and melting studies (performed on four ligands) established the following trend: C8 > pyridostatin > C8-NH2 > [16]phenN2. Fluorescence spectroscopy titration (performed on three) revealed a similar trend: C8 > C8-NH2 > [16]phenN2. Lastly, affinity chromatography experiments were held to test how other DNA sequences would bind to C8-NH2. The results revealed that the ligand has better binding affinity with parallel quadruplexes over antiparallel ones, and poor binding with a duplex sequence. Overall, the best ligands identified for binding to the G-quadruplex structure were the acridine orange derivatives C8 and C8-NH2, and pyridostatin. These three ligands should be considered prime candidates for further research in this area.
- Fatores de Sucesso em Organizações DesportivasPublication . Almeida, Cárin Alexandre Dinis Lourenço de; Madeira, Maria José Aguilar; Carvalho, Pedro Guedes deDevido ao aumento da procura e da oferta de atividades físicas e desportivas, as organizações que oferecem tal serviço necessitam de se destacar para alcançar o sucesso, como forma de perpetuar a sua própria existência, perpetuando-se através do recrutamento e retenção de atletas ao longo do tempo. Os fatores críticos de sucesso das organizações desportivas tornam-se, assim, fulcrais para determinar como estas poderão alcançar o sucesso, e consequentemente, manterem-se em funcionamento. Este projeto tem como objetivo identificar, analisar e associar os fatores críticos de sucesso numa organização desportiva. Dos variadíssimos fatores que poderão ser encontrados no funcionamento de uma organização, três foram considerados os mais relevantes para este estudo, nomeadamente: comunicação; capacidade financeira; patrocínios; e estrutura organizacional. Reconhecidos estes fatores, a investigação passa por analisar qual a influência que cada um deles tem no sucesso da Academia José Moreira, sendo este o objeto de estudo. Neste seguimento e pretendendo dar resposta aos objetivos definidos, desenvolveu-se uma investigação de natureza qualitativa enquadrada na metodologia de estudo de caso exploratório, elaborou-se um guião de entrevista, visando a recolha de dados. Ao longo do trabalho, constatou-se uma escassa literatura relativamente aos fatores críticos de sucesso associados às organizações desportivas. Pelo que se torna imprescindível a recolha, tanta quanto possível, de informação sobre esta temática, sistematizando-a e transportando-a, posteriormente, para as organizações desportivas. Atendendo aos fatores críticos de sucesso identificados neste trabalho, nomeadamente: comunicação; capacidade financeira; patrocínios; e estrutura organizacional, conclui-se que a comunicação existente no seio da organização demonstra ser o principal fator crítico de sucesso.
- A Imunologia Clínica no ensino pré-graduado de MedicinaPublication . Victor, Ângela de Lourdes; Fonseca, Ana Mafalda Loureiro; Barata, Luís Manuel TabordaIntrodução e objetivos: Desde o surgimento do “Relatório Flexner” no início do século 20, o currículo médico tem passado por mudanças com objetivo de melhorar a qualidade da Educação Médica. Em todo o mundo, as escolas médicas empregam várias estratégias para melhorar a entrega do currículo, como a implementação e/ou integração de currículos com base na teoria e prática fundamentais. Neste contexto, ao longo do tempo a Imunologia Clínica que tem-se constituído como uma disciplina científica de maior relevância médica, contribuindo para o diagnóstico clínico, laboratorial, tratamento e prevenção de doenças. No entanto, nem todas as Escolas Médicas incluem a Imunologia Clínica como unidade curricular de forma isolada como é o caso da Faculdade de Medicina da Universidade 11 de Novembro -Cabinda, mas que os conteúdos são integrados em outas unidades curriculares. Assim sendo, com base na melhoria da qualidade de educação médica, surgiu a necessidade de formalizar uma proposta de implementação da unidade curricular “Imunologia Clínica” na formação em Medicina para esta faculdade. Métodos: O trabalho resulta de uma revisão bibliográfica sobre os aspetos gerais e de relevância da Imunologia Clínica no ensino pré-graduado de Medicina. Foram analisados os currículos de algumas Escolas Médicas em que o ensino formal da Imunologia faz parte do currículo do curso, ao nível da pré-graduação. As informações foram obtidas a partir de livros ligados à área da Imunologia Clínica, artigos científicos, utilizando ferramentas de busca como a Pubmed, Scielo e Google Académico. Também foram utilizados questionários “on line” para a avaliação da perceção dos estudantes do ciclo clínico de Medicina da Universidade 11 de Novembro sobre a importância da Imunologia na formação médica, bem como também avaliar o grau de conhecimento dos estudantes do 6° de medicina sobre os conceitos de Imunologia Básica e Clínica que estes adquiriram durante a sua formação médica. A um total de 278 estudantes inscritos no ciclo clínico da Faculdade de Medicina da Universidade 11 de Novembro, no ano académico 2018 foi solicitada a resposta aos questionários. A análise dos dados foi feita com base no “Google Forms ®” e no software Microsoft Excel®. Resultados: Da amostra dos 278 estudantes do Ciclo Clínico matriculados na Faculdade de Medicina de Cabinda no ano académico 2018, 159 responderam ao questionário, o que representa uma taxa considerável de adesão ao estudo (57%). Relativamente à perceção dos estudantes sobre a importância da Imunologia Clínica na formação em Medicina, verificou-se que 92,5% dos estudantes consideram importante a Imunologia Clínica no currículo Médico, e 71,7% consideram necessário aumentar os conteúdos em Imunologia no currículo, visto que os conhecimentos adquiridos em outras unidades curriculares têm sido úteis durante as suas rotações clínicas. Quanto ao questionário sobre a avaliação do conhecimento teórico em Imunologia Básica e Clínica, verificou-se que mais do que a metade dos estudantes, responderam erradamente as questões, sendo a média de pontuação 9,5/20 pontos. Conclusões: Após a realização do estudo, concluiu-se que há necessidades de implementar a unidade curricular de forma isolada no currículo médico na Faculdade de Medicina de Cabinda, dada a sua importância na prática médica, garantindo assim maior qualidade de ensino.