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- Developing a NGS panel for diagnosis of Lyme disease and its co-infectionsPublication . Coelho, Eduardo Augusto; Gonçalves, Isabel Maria Theriaga Mendes Varanda; Doria, GonçaloLyme disease, also known as Lyme borreliosis, is the most common-tick borne disease in the northern hemisphere, with 300,000 cases estimated each year only in the United States. In addition to the transmission of Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.), the bacteria responsible for Lyme disease, ticks of the Ixodes ricinus complex are vectors for other infections, with the most common being babesiosis and human granulocytic anaplasmosis. The presence of co-infections may cause more severe clinical manifestations and their misdiagnosis may lead to an inappropriate treatment. The only accepted method to diagnose Lyme borreliosis, currently, is a serologic test based in a two-tier approach using an enzyme immunoassay (EIA) complemented with a Western immunoblot. This indirect method for Borrelia burgdorferi s.l. detection suffers from lack of sensitivity in the early stage of the disease, due to the time window needed for antibodies to be produced. Over the past few decades, many studies have been carried using direct methods, such as culture and PCR, in order to develop an alternative diagnostic method for this infectious disease, however this tests also suffer from a high rate of false negatives. In this study, a NGS panel was developed, for the Illumina's Miseq platform, which allows the simultaneous diagnose of Lyme disease and its most common co-infections. This panel includes seven specific primer pairs that target a gene fragment of each of the included pathogenic species, in regions that allow the genospecies distinction. The panel was tested in the library preparation for sequencing using samples of whole blood and samples of extracted DNA from the whole blood. Along with the developed panel, in order to evaluate its sensibility, both types of samples were also tested with specific primers that target the V3 and V4 regions of the 16S ribosomal RNA gene, widely used in microbiome analysis. Due to the difficulty to obtain samples from patients with Lyme disease and with the other infections covered by the panel, in this study, five samples of whole blood from patients diagnosed with babesiosis were tested, along with a positive and a negative controls. The condition that has shown better results was the one using extracted DNA from the blood combined with the panel, which detected Babesia microti DNA in all five samples of the infected patients. Despite the need to test this method in samples from patients with Lyme disease and the remaining infections included in the developed panel, the results obtained in this study are promising for the future use of this method as an alternative to the current tests, especially in the initial phase of infection.
- Biosynthesis of small noncoding RNAs in Rhodovulum sulfidophilumPublication . Dias, Jane Risete Pires dos Santos; Passarinha, Luís António Paulino; Sousa, Fani Pereira deBiosynthesis of noncoding RNAs (ncRNAs) in microorganisms has stood out as a cost-effective and favourable method for natural RNA production, and Rhodovulum sulfidophilum (R. sulfidophilum), a marine phototrophic bacterium, has been studied as a potential host for this bioprocess. Then, this work intends to optimize, in a mini bioreactor platform, the fermentation process of R. sulfidophilum strain DSM 1374 as a recombinant host to produce ncRNAs. So, the effect of the inoculum size, temperature and oxygen availability was studied, and the best outcome was achieved in fermentations at 30 ºC with 18% inoculum where fully aerobic-dark conditions are provided. Under such conditions the effects of the main carbon source were analysed in which glucose (Si = 10 g/L) was replaced by glycerol in R. sulfidophilum fermentation. Glycerol metabolization was analysed when using differents initial concentrations (Si = 20, 10, 5, and 2.5 g/L) and the consumption of both the carbon sources was assessed by HPLC-RID. Briefly, the optimized conditions in bioreactor scale yielded 1.8 times more biomass when glycerol (Si = 10 g/L) was the main carbon source, and 2.3 times more biomass compared to the optimized conditions in shake flask scale. Both carbon source lead to a maximum of total RNA production at 60 h, being of 537 ± 49 µg/mL in glucose and 446 ± 58 µg/mL in glycerol. Noteworthy, the electrophoretic qualitative analysis of small ncRNAs biosynthesis demonstrated a higher concentration also at 60 h in both glucose and glycerol fermentation. The results from the batch fermentations suggest a more efficient utilization of glycerol by R. sulfidophilum which reflects in higher biomass and reasonably higher ncRNA productivity. With a view of increasing the overall biomass and productivity, fed-batch experiments were carried out through constant glycerol feed. The results proved that a feed solution containing only glycerol does not lead to biomass increasing, as is expected, highlighting the interaction of different growth limiting factors. All these results together leave an open door for the study of glycerol as a substrate for recombinant biosynthesis of ncRNAs in R. sulfidophilum, specifically for the development of new feed strategies adequate to the nutritional requirements of the bacteria and that allow increasing the biomass and the productivity of ncRNAs.
- Terapia do cancro do colo do úteroPublication . Faria, Rúben Miguel Ribeiro; Costa, Diana Rita Barata; Sousa, Ângela Maria Almeida deNa última década, vários investigadores têm realizado diversos estudos com o intuito de projetar e desenvolver sistemas de entrega de material genético que pudessem ser biocompatíveis e competentes para internalizar em células alvo. Este enorme contributo para o sucesso das terapias génicas foi complementado com a aplicação de sistemas de co-entrega que permitem entregar simultaneamente genes e drogas anticancerígenas. O efeito sinergético demonstrado por estes agentes trouxe um enorme progresso na eficácia terapêutica para o tratamento de diversos cancros. O cancro do colo do útero é um dos cancros com maior incidência nas mulheres em todo o mundo, especialmente em mulheres jovens. O aparecimento desta doença advém da infeção pelo vírus do papiloma humano (HPV), sendo os genótipos de elevado risco responsáveis por 99,7% dos casos. Em particular, os genótipos do tipo 16 e 18 são responsáveis por mais de 70% das ocorrências. A infeção por HPV é responsável pela integração do genoma viral nas células do colo do útero levando à interrupção da sequência da proteína E2 que é repressora das oncoproteínas E6 e E7. A oncoproteína E6 induz a degradação do supressor de tumor p53, responsável por regular a apoptose das células. No caso da proteína E7, inibe a atuação da proteína do retinoblastoma (pRb) levando a uma desregulação do ciclo celular e consequente crescimento descontrolado das células. O objetivo deste trabalho prende-se por repor os níveis da p53 no interior das células cancerígenas do colo do útero através da entrega de um plasmídeo (pDNA) que codifica para este supressor de tumor, e em simultâneo entregar também um fármaco anticancerígeno com o objetivo final de induzir a apoptose destas células de forma mais eficiente. Para este fim, foi desenvolvido um sistema de co-entrega baseado no polímero catiónico polietilenimina (PEI) que permitiu encapsular o DNA plasmídico que contém o gene da p53. Adicionalmente, o fármaco anticancerígeno metotrexato (MTX) foi também encapsulado nestes vetores poliméricos. A utilização da droga MTX na formulação destes sistemas deve-se, não só ao seu efeito terapêutico já comprovado em diversos tipos de cancro, mas também ao facto de ser reconhecido pelos recetores do ácido fólico, abundantemente presentes nas células tumorais, conferindo assim um direcionamento dos sistemas para as células alvo. Os resultados obtidos neste trabalho revelam que os dois sistemas formulados (PEI/pDNA e PEI/pDNA/MTX) produziram nanotransportadores com características apropriadas em termos de morfologia, tamanho e carga à superfície para a captação e internalização celular dos dois agentes terapêuticos. As células HeLa foram transfetadas com sucesso pelos sistemas que contêm o gene responsável pela produção da proteína supressora de tumor p53. O efeito terapêutico dos dois sistemas foi avaliado, comprovando-se que os poliplexos que continham os dois bioativos inibiram com maior eficácia o crescimento das células tumorais em comparação com o sistema PEI/pDNA. O efeito sinergético evidenciado nas células cancerígenas com a utilização desta co-entrega de um agente genético e de um fármaco anticancerígeno é promissor para estudos adicionais in vivo e futura aplicação terapêutica. Além disso, a utilização combinada de quimioterapia e terapia génica nas células alvo representa um avanço incrível no desenvolvimento de intervenções terapêuticas inovadoras, podendo assim contribuir grandemente para a evolução do tratamento de vários tipos de cancro.
- Comunicação de Crise no DesportoPublication . Cardoso, Mário Filipe Felício; Serra, Joaquim Mateus PauloA reputação de um clube desportivo, desde a profissionalização dos mesmos, torna-se vital para o seu bom funcionamento. Para contrariar situações de risco ou críticas para um clube, a gestão da sua comunicação necessita de ser apurada na defesa da imagem e dos valores que transmite. A comunicação estratégica no setor desportivo não é tão linear como em outras indústrias, devido ao carácter emocional que o futebol oferece aos adeptos dos clubes. Apesar de os adeptos, contrariamente com o que acontece noutras indústrias, não alterarem, com tudo o que possa acontecer, as suas preferências clubísticas, é necessário que a organização desportiva proteja a sua reputação, a sua credibilidade e os seus produtos em caso de crise, de forma a assegurar a venda de merchandising, as parcerias e os resultados desportivos. Em cada país, apenas um clube consegue ser campeão nacional e, assim, cumprir os seus objetivos desportivos. Sendo os resultados desportivos o grande potenciador do lucro, os dirigentes desportivos tendem a utilizar todas as ferramentas disponíveis para ganhar vantagem sobre os adversários, dentro e fora de campo. Os resultados desportivos e as performances dentro do campo podem ser tão impulsionadores de uma crise como uma situação crítica como o “Caso E-mails”. Portanto, os departamentos de comunicação têm cada vez mais importância na defesa da reputação, legitimidade e transparência dos clubes de futebol, o que incitou à realização desta investigação. O principal objetivo é perceber se, com a emergência e o desenvolvimento do “Caso E-mails”, a reputação do Sport Lisboa e Benfica ficou afetada ou não. Para isto, foram recolhidos dados através de diferentes técnicas, de forma a ter uma perspetiva alargada da situação e chegar a uma conclusão rigorosa. Esta situação crítica, com que o Sport Lisboa e Benfica se vem debatendo, ainda não terminou, tendo sido agravada por outros casos resultantes desta. Assim, pretende-se analisar a comunicação do clube no período de cerca de um ano, iniciando a análise na emergência do caso. Visto que a área de comunicação no setor desportivo ainda não tem a mesma atenção que outras vertentes das Relações Públicas, esta dissertação pretende, também, apresentar um contributo teórico-prático para a evolução do estudo do tema e, consequentemente, chamar a atenção para a pertinência do mesmo, pelo menos no contexto português.
- As Relações Públicas e a Imagem de MarcaPublication . Pimpão, Sara Pinto; Elias, Herlander AlvesA consolidação da importância do processo comunicativo e do marketing, originou uma desconstrução cada vez mais aprofundada das técnicas comunicacionais e do próprio conceito de marketing, resultando em várias variáveis e, consequentemente, em novos conceitos base que devem ser tidos em conta em qualquer estratégia de comunicação. A manutenção da imagem de marca, isto é, manter uma imagem pública positiva e relevante é uma necessidade constante e intrínseca às estratégias de comunicação de uma entidade. Hoje em dia, todas as formas de comunicação influenciam a opinião pública que, por sua vez, é o veículo máximo para a construção de uma identidade competitiva e uma posição de significativa notoriedade. Para tal, as entidades apostam cada vez mais em ações de comunicação personalizadas, através das estratégias da prática de relações públicas. O presente relatório de projeto visa suportar teoricamente a análise sobre a importância da comunicação e da influência que a prática de relações públicas pode ter no seio de uma organização de relevância nacional e internacional, a Federação de Desportos de Inverno de Portugal (FDI-Portugal). O projeto consiste no desenvolvimento de um Plano de Comunicação para a FDI-Portugal, identificando-se o que é um plano de comunicação, porque é que se faz, como é que se faz e com que objetivos.
- Design como Catalisador ReflexivoPublication . Bravo, João André Calado; Estevão, Sara VelezAlicerçada nos ideais reflexivos, cético e críticos inerentes à teoria crítica, o design durante os anos 1956 e 1970, adotou uma postura que fosse capaz de reivindicar a sua autodeterminação cognitiva e liberdade criativa. Estas pretensões foram impulsionadas pelas premissas neo-construtivistas de Bruno Munari que serviram de base para os designers ambicionarem que esta área fosse contemplada como um veículo de modificação social. Desta pretensão, surgem os ideais e o termo “design crítico” cunhado por Anthony Dunne na sua obra Hertzian Tales (2005) em que se verifica a sua vontade de transformar o design num verdadeiro veículo de reflexão social. A evolução inerente ao design crítico, culmina na utilização de especulações sobre o futuro e desta mutação surge o design especulativo. Tendo como base ideológica as reivindicações de conferir ao design um papel muito mais preponderante na esfera social do que aquele que lhe era atribuído, este tipo de design fez espoletar críticas noutras áreas, como é o caso do design associativo como crítica ao design industrial, o design discursivo como tentativa de comunicar através do design e o design fiction como uma área que colocasse em prática as pretensões do design crítico e especulativo sob um fundo de ficção científica. Apesar de aparentarem algumas especificidades, todas estas áreas partem da mesma base ideológica que preza pela utilização do design como um verdadeiro catalisador de reflexão social, em que as suas práticas de prospectivação podem conduzir o público a determinarem o que pretendem do futuro. Partindo sempre do presente desenvolvimento científico e tecnológico, a aplicação do exercício crítico e especulativo no design é caracterizado pela materialização de presentes alternativos ou possíveis futuros, como forma de cativar a atenção do público para uma temática que merecesse ser submetida a uma reflexão pública antes de ser disseminada. Recorrendo-se à análise de projetos de design especulativo e de dois episódios da série antológica Black Mirror, o objetivo principal desta dissertação rege-se pela clarificação dos conceitos e práticas inerentes ao design especulativo e pela forma como as suas premissas podem contribuir para dar respostas a problemas que residem no contexto mundano.
- Assessing the effort of exercise using low cost sensorsPublication . Anastácio, Carlos Pedro Lourenço; Fazendeiro, Paulo André PaisIn this work, it is proposed a solution that tries to help the physical education teachers in the assessment of their students, also trying to increase the motivational levels of students with the inclusion of new technologies in class, and with the fact that the presented metric, being estimated for each student from their own effort. It is proposed a solution that uses a sensor, in this case an accelerometer, in order to capture accelerometry data during the execution of four physical activities: volleyball, handball, basketball and futsal. Data was retrieved from two classes of the 9thº Portuguese school year. The device used to capture those accelerometry data was the student’s own smartphones, through a mobile application that collects data and sends it to a server. After that data is uploaded, it is analysed in order to calculate the metric Running Equivalent of Activity (REA). An empiric study was developed aiming at the experimental validation of the metric referred above, having been followed diverse experimental protocols. A set of good practices is suggested for the adoption of the proposed solution, a mean to enable a fair and equitable assessment of the effort applied by the students during the physical education classes.
- Dynamic Behavior of a Single Droplet Impinging onto a Sloped SurfacePublication . Ferrão, Inês Alexandra dos Santos; Silva, André Resende Rodrigues daDroplet impact is a common phenomenon that occurs frequently in several applications such as fuel injection in internal combustion engines, processes involving spray paints and cooling of electronic equipment. Due to the technological advance, it becomes possible to observe in detail the dynamic impingement. In the study of droplet impingement, the influencing parameters are the liquid, along with its physical properties, the impact surface, the surrounding environment, or by the action of gravity. The combination of these terms lead to different and unique effects. The researches concerning the dynamic behavior of oblique impacts are scarce and not fully understood. Consequently, it was decided to deepen its theme through the development of this work. The major goal of the present work is a comparison that involves an experimental study of the phenomena occurring during the impact of liquid droplets onto a dry surface with a cross flowing air and droplets impact onto a sloped surface, using two dry aluminum plates with mean roughness (Ra= and Ra= ). Due to the crossflow, the droplet does not have the same direction as the gravitational acceleration and suffers a certain deformation that seems to vary the condition. For the sloped surface, the droplet is spherical throughout the trajectory and both the gravitational acceleration and movement of the droplet have the same direction. In this study, it was considered a crossflow velocity of 7m/s and it was designed a mechanism that has the possibility to vary the surface angles. Four fluids were used: 100% Jet-Fuel, 75%JF - 25%HVO, 50%JF - 50%HVO and H2O (pure water) as a reference. It was considered a combination of a conventional jet fuel and a biofuel (HVO – Hydroprocessed Vegetable Oil), more specifically Jet A-1 and NEXBTL, with the aim to implement new alternatives to reduce the pollution levels. It is through these innovations that it is possible to improve various systems such as piston engines or gas turbines with alternative fuels. In order to maintain the coherence of the results between the two experimental works, the impact velocity and incident angle were kept approximately the same, in the two activities. Due to the different impact conditions, only two phenomena were expected for this comparison: spreading and splash. A MATLAB algorithm was developed to achieve the different droplet diameters and impact velocities. The researches concerning the dynamic behavior of oblique impacts are scarce, and not fully understood. The experimental data obtained allows comparing the splashing thresholds available in the literature. The purpose of this empirical correlations is to predict the transition between deposition and splash. Therefore, the normal impact was also studied and analyzed the splash/non-splash transition for the two impact surfaces analyzed.
- Metodologias ativas para o ensino da Histologia no curso de MedicinaPublication . Nlolo, Alexandrina Florbela Futi Matondo; Vico, Manuel; Fonseca, Ana Mafalda LoureiroA Histologia no curso de Medicina usualmente é dada no ciclo básico durante os primeiros 2 anos. Ela estuda os detalhes microscópicos e estruturas das células e tecidos biológicos usando o microscópio, e nos últimos dias ela passou a ser uma disciplina que procura resolver os problemas médicos, mediante a criação de tecidos biológicos artificiais o que é conhecido como engenharia de tecidos. A educação médica ao longo da História sofreu muitas reformas, e entre elas destaca-se a introdução de metodologias ativas, que estimulam a reflexão do estudante, propiciam pensamento criativo e crítico, aprendizagem mais profunda e são bastante utéis para a qualidade da educação médica, dentre elas com maior destaque neste trabalho está a aprendizagem baseada em equipa. O presente trabalho consiste no estudo de metodologias ativas no estudo de Histologia, com enfoque na aprendizagem baseada em equipa, através de um projeto pedagógico no intuito de aplica-se futuramente na faculdade de Medicina de Cabinda, este método de ensino é muito importante pois permite que os estudante tenham um melhor desempenho, que aumente o raciocínio crítico, habilidades interpessoais como comunicação trabalho em equipa e liderança. Espera-se que este trabalho seja um recurso útil para os professores de Histologia da faculdade de Medicina de Cabinda, para que possam empregá-lo e obter melhores resultados no processo de ensino e aprendizagem.
- Criação de uma ferramenta para geração de impressões digitais de áudioPublication . Santos, Rui Miguel da Silva; Santos, Nuno Manuel Garcia dos; Pombo, Nuno Gonçalo Coelho CostaA utilização de aplicações com o intuito de realizar um reconhecimento de áudio tem crescido nos últimos tempos. Uma das aplicações mais reconhecidas, neste momento, é o Shazam que tem como objetivo o reconhecimento de músicas. Nesta é possível, ao realizar uma captura de áudio ficar-se a saber qual o nome da banda e da música em questão. Assim sendo, neste projeto são apresentados dois métodos capazes de construir um audio fingerprint e a sua classificação. Aqui, serão descritos todos os procedimentos realizados bem como realizada uma discussão dos testes e resultados obtidos pelo sistema desenvolvido. Está presente uma comparação relativamente ao desempenho observado pelos dois métodos desenvolvidos. Adicionalmente, é realizado um estudo relativo ao estado desta área.